tau+c1q--双转基因小鼠模型的建立及c1q影响tau蛋白磷酸化的研究

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1、中图分类号一R74UDC博士学位论文密级盟Tau+／clq．／-双转基因小鼠模型的建立及clq影响Tau蛋白磷酸化的研究(Tau+／clq—ldoubletransgenicmousemodelconstructionandtheresearchofclq’SeffectonTauproteinphosphorylation)作者姓名：孙启英学科专业：临床医学研究方向：神经病学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：唐北沙副指导教师：申勇答辩委员会主中南大学2013年6月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及

2、取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：剁∑盈墓日期：立吐年上月—L日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息

3、研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：每年』月≥日Tau+／clq-／-双转基因小鼠模型的建立及clq影响Tau蛋白磷酸化的研究摘要第一部分Tau+／clq-／．双转基因小鼠模型的建立背景：神经原纤维缠结(neurofibrillarytangle，NFTs)是阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)的主要病理学特征之一。NFTs的主要成分是异常过度磷酸化的Tau蛋白。Tau蛋白是一种广泛分布在中枢神经系统细胞内的重要的微管相关蛋白，与微管共同构成细胞骨架结构，其

4、生理功能主要为诱导与促进微管蛋白聚合成微管并防止微管解聚以及维持微管结构与功能的稳定。当Tau蛋白在各种情况下出现异常过度磷酸化等修饰，将失去对微管的稳定作用，进而导致神经退行性变。AD的发病机制目前尚不清楚。近年来随着研究的不断深入，发现由神经胶质细胞主导的颅内慢性炎性反应在AD发病过程中起了重要作用。补体系统是机体体液免疫的重要组成部分，也参与了上述炎性反应。补体(complement，C)是存在于正常人和动物血清与组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质，主要由肝脏产生。目前已知补体是由30余种可溶性蛋白、膜结合性蛋白和补体受体

5、组成的多分子系统，故称为补体系统(complementsystem)，主要有经典途径、凝集素途径、替代途径等三种激活途径。根据补体系统各成分的生物学功能，可分为补体激活的固有成分、补体的调节成分以及补体受体(CR)，其中大部分是分子量较大的蛋白。一般情况下，血液中的补体成分无法通过血脑屏障(Bloodbrainbarrier，BBB)。研究表明脑内补体由神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞以及内皮细胞等产生。目前发现颅内细胞产生的补体与AD发病密切相关。在AD患者大脑中，研究者发现补体经典途径早期成分C1、C2、C4等和补体

6、活化最终形成的攻膜复合体(MAC)的表达。除经典途径外，Strohmeyer等人发现补体的替代通路也与AD的病理损害相关。Lanzrein等人在AD患者与正常对照组外周血清中，发现甘露聚糖结合凝集素并未有显著差异，但是在脑脊液中，AD患者甘露聚糖结合凝集素却有明显降低，支持凝集素途径也参与AD的发病。然而补体各成分在AD发病中所起作用目前仍不甚清楚。clq是构成补体经典途径第一成分Cl的重要成分。clq与免疫复合物结合，即可启动补体经典通路的活化。近年来对补体clq的研究发现其在AD发病中可能起着多种作用。部分学者认为clq在AD发病

7、中起着毒性作用：clq通过与Ap多价结合，促进老年斑的成核过程。而部分学者则认为clq具有保护作用，Pisalyaput等通过体外实验证实clq可以增强小胶质细胞吞噬A13，可以保护神经元免受Ap所致神经毒性。但是目前国内外尚无关于clq蛋白影响Tau蛋白的研究。B6C3．Tg(Prnp—MAPT*P301S)PSl9小鼠系为过表达人类MAPT基因(Tau蛋白的编码基因)P301S突变的转基因小鼠，在6个月龄时病理学上即出现双螺旋细丝(Pm)、突触蛋白的丢失以及小胶质细胞的活化，9个月龄时出现神经原纤维缠结(NFTs)以及海马体积的缩

8、小，是目前研究Tau蛋白病的理想动物模型。clq．／-小鼠系为clqA链敲除小鼠系，广泛用于clq的相关研究中。为了探讨clq蛋白对Tau蛋白的影响及其机制，本课题拟首先建立Tau+／clq．／．双转基因小鼠模型。目的：