sonic hedgehog信号通路在肾间质纤维化进展中的表达变化及意义

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1、温州医学院硕士学位论文论文题目：SQ垒i堡H星鱼g曼№g篮曼通路查竖闻厦红维化进屋虫的麦达变化拯意竖围迭匾数援(湿趔医堂医附屉箍二医院2奎囱田塾援(遏趔医堂院附届筮三医院2挫堕登数援(湿趔医堂陵2温州医学院硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．59独创性申明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60温州医学院硕士学位论文SonicHedgehog信号通路参与肾间质纤维化进展的研究中文摘要背景肾小管间质纤维化(Tubulointe

3、rstitialfibrosis，TIF)是各种慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的共同通路，肾小管上皮细胞凋亡和表型转化在TIF过程中发挥重要作用。过量服用含马兜铃酸(aristolochicacid，AA)中草药引起的马兜铃酸肾病以肾间质进行性纤维化为特征，最终引起肾功能衰竭。单侧输尿管梗阻(unilateralureteralobstruction，UU0)模型是目前应用较为广泛的研究肾小管间质进行性纤维化的经典动物模型。近年研究表明，Sonichedgehog(Shh)信号通路在细胞增殖，促进器官纤维化中起重要作用，但关于Shh与TIF的关系则未见报道。因此，我们

4、通过AA作用肾小管上皮细胞和建立UUO模型来探讨Shh通路在肾间质纤维化过程中的活化情况。目的1．利用不同浓度AA作用大鼠肾小管上皮细胞NRK．52E，观察细胞表型活化及ECM情况，探讨AA对肾小管上皮细胞的损伤作用及Shh信号通路在肾小管上皮细胞损伤过程中的作用。2．通过建立UUO动物模型，探讨Shh信号通路在。肾间质纤维化过程中的表达变化及可能的作用机制。方法1．体外实验：①培养大鼠肾小管上皮细胞N】Ⅸ．52E。实验分为对照组和AA组。对照组：不JJHAA；AA组：将1、10禾1100肚g／mlAA加入到细胞培养基中。②细胞培养24、48、72h后，WST．1法

5、检测细胞增殖抑制率；Hoechst33258染色观察胞核形态变化；real．timeRT．PCR检钡UPtchl、Smo、Ⅱ．SMA、E．cadherin、TGF．B1和III型胶原mRNA表达；WestemBlot检测bcl．2、bax、0【．SMA和E．cadherin蛋白表达；ELISA检测肾组织dPTGF．131茅1]Shh含量。2．UUO模型实验：①选用48只SD大鼠随机分为UUO组和假手术组，分别于术后第3、7、14天处死取其肾脏组织。②用HE、Masson染色观察UUO大鼠TIF程度。③实时定量．聚合酶链式反应检测Sllll信号和纤维化相关分子I型、I

6、II型胶原的表达。④免疫组织化学染色检测Shll信号分子和III型胶原的表达。@ELISA检测肾4温州医学院硕士学位论文组织qbTGF．131和Shh含量，并分析两者相关性。3．统计学分析：采用SPSSl3．o软件包进行统计学分析，数据以均数4-标准差(；土s)表示，组间均数比较采用f检验或单因素方差分析，评价Shh蛋白与TGF-131含量的关系采用直线相关分析。以P<0．05为差异有统计学意义。结果1．体外实验：予不同浓度AA作用体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK．52E，AA明显抑制NRK．52E细胞增殖，并呈浓度依赖性(F0．817，P=-0．047)。1和1

7、0pg／mlAA可诱导细胞凋亡，100pg／mlAA贝,lJ诱导细胞坏死。AA以10蚓ml处理细胞24h后，bcl．2表达下调而bax升高，TGF．131、0【．SMA和III型胶原表达增加，而E．cadherin表达下降(P<0．05)。Shh通路分子Shh、Smo、和GlimRNA和蛋白表达均明显升高；PtchmRNA和蛋白表示水平明显下降(P<0．05)。2．UUO模型实验：UUO组肾组织出现明显的TIF，并且随梗阻时间延长，TIF程度加剧。UUO肾组织TGF．131、I型并1]III型胶原含量较假手术组均明显升高(尸<0．05)。同时，Shh通路分子Sh