腺苷信号通路在肾间质纤维化过程中的作用机制研究

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1、中图分类号—R69—2．9UDC616．6博士学位论文学校代码!Q5三3密级公珏腺苷信号通路在肾问质纤维化过程中的作用机制研究rTll‘^‘一‘lnemechanismofadenosinesignalingmediatedrenalinterstitialnbrosls●●‘^‘‘作学研学指汤进临床医学泌尿外科学中南大学湘雅三医院蒋先镇教授论文答辩日期2Q，3：垒：2z答辩委员会主席兰鳌尘!中南大学2012年11月、^＼名业向所师姓专方系教者科究院导原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和

2、致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：＆空一日期：丝年皇月旦日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签

3、名：妲导师期：型年朔抽第一章腺苷信号通路诱导肾间质纤维化的形态学研究摘要：目的：观察ADO信号通路对肾间质纤维化过程的影响。方法：(1)动物分组：共44只雄性小鼠，采取随机分组的方式，分成3个组别：其中，假手术组(Sham)12只，模型组(UUO)16只，干预组(PT)16只。干预组在单侧输尿管结扎(UUO)基础上予茶碱(8．PT)10mg／kg·d腹腔注射(1次／天)，模型组在uUO基础上予生理盐水腹腔注射。于实验第1、3、7、14天分批次对小鼠进行处死操作，其中，假手术组实验小鼠，每次处死只数为3只，而模型组和干预组这两个组别的小鼠，每次处死的只数为4只。在处死前2

4、4小时将小鼠置入代谢笼内收集24小时尿测定尿肌酐(Ucr)、t32微球蛋白(B2-MG)含量；处死前1．5小时通过小鼠阴茎静脉注射低氧探针Hypoxyprobe一1(60mg／kg)。小鼠处死后，留取进行了结扎处理一侧的肾组织，开展后续的形态学以及免疫组织化学两个方面的研究。(2)观察指标：通过对肾组织进行HE以及Masson染色处理后，观察三个不同实验组的小鼠肾组织中肾小管受损的程度、肾间质中炎性细胞的侵润状况以及肾问质纤维化程度；运用免疫组织化学技术观察实验对象的肾小管上皮细胞和间质细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达状况以及肾组织低氧程度及分布；利用高效液相色谱法

5、(HPLC)检测肾组织中腺苷(ADO)的水平。结果：(1)叫O术后肾组织处于持续低氧状态，肾组织内ADO水平较假手术组明显增高；(2)UUO术后小鼠肾组织均发生了不同程度的肾小管受损状况，而茶碱能够对这类损伤提供一定的保护作用；(3)在实验小鼠肾间质出现纤维化的过程中，PCNA的阳性表达随时间延续主要集中于肾间质部分；尤其是UUO组，肾间质细胞持续处于高增殖状态；(4)在模型组实验小鼠的观察过程中发现：小鼠的肾间质炎性细胞侵润随病程的进展出现了进行性加重的趋势，使用茶碱进行处理后这种炎性细胞侵润的状况则大幅降低；(5)使用茶碱处理后，干预组小鼠的肾间质纤维化程度显著低于

6、同期模型组。结论：(1)肾间质纤维化过程中存在肾组织持续低氧，伴随组织内ADO水平升高；(2)阻断ADO信号通路，能抑制炎症细胞侵润、肾间质细胞增殖及纤维化，对肾功能起保护作用。图12幅，参考文献39篇。关键词：肾间质纤维化；动物模型；腺苷；茶碱分类号：R692．9U第二章ADO导致肾间质纤维化的分子机制研究摘要：目的：观察肾间质纤维化过程中相关致纤维化因子的动态变化与ADO的关系。进一步阐明肾间质纤维化的发生机制和ADO致纤维化的分子机制。方法：44只雄性小鼠随机分成3组：假手术组(Sham)12只，模型组(UUO)16只，干预组(PT)16只。干预组在单侧输尿管结扎

7、(UUO)基础上予茶碱(8．PT)lOmg／kg·d腹腔注射(1次／天)，模型组在UUO基础上予生理盐水腹腔注射。利用RT．PCR方法动态观察术后第1、3、7、14天肾组织TGF．B1、PAI．1、Q】(I)proeollagenmRNA表达；并利用免疫组织化学方法观察各实验组肾组织TGF．B1、Q平滑肌肌动蛋白(Q．SMA)的蛋白表达和分布规律。结果：(1)模型组小鼠肾组织TGF—B：、PAl．1、CI1(I)procollagenmRNA表达明显上调并随时间延续进行性升高。(2)阻断ADO信号通路后对肾组织TGF．p1、PAl—l、0