脑肠肽对肾间质纤维化疗效及作用机制的研究

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1、分类号密级ＵＤＣ编号硕壬学位论文廣巧肤对肾间巧奸维化巧效及作用机制的研究Ｔｈｅｅ化ｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｈｒｅｌｉｎｏｎｒｅｎａｌｉｎ化ｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｇ孙光巧导师獲名赵明巧巧专化备巧泌尿外科培养类型学术型论文巧《日期２０１５年３月３１日南方医科大学２０１２级硕壬学位论文脑肠肤对督间质纤维化疗效及作用机制的研究Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｇｈｒｅｌｉｎ

2、ｏｎｒｅｎａｌｉｎｔｅｒｓ村村ａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ８ｉｎ〇６９６课题来源：国家自然科学基金（）学位申请人孙光曠导师姑若赵明教授专业違称泌尿外科（肾移植）培养类型学术型培养层次硕去研究生所在学院第二临床医学院答辩委员会主席陈立中教授答辩委员会委员徐健教授｛ｙ｛＾林民专教授王平教授／李民教授２０１５年３月３１曰广州硕去学位论文脑肠化对督间廣纤维化疗效及作用机制的研究硕±研究生；孙光犧指导教师：赵明教授摘

3、要第一章脑肪化对ＵＵＯ大鼠肾间质纤维化影响及机制；（ＲｅｎａｌｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓＲＩＦ）是由多研究背景肾间质纤维化，种原因引起的细胞外基质（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）过渡沉积，并最终导致肾脏纤维形成和功能丧失，是多种慢性肾脏疾病（ＣｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｄｉｓｅａｓｅＣＫＤｙ，）进展至终末期肾病的最后共同通路，也是导致终末期肾功能衰竭的主要病理基础。目、血前针对终末期肾衰竭只能实施腹膜透析液透析和肾脏移植等替代疗法，而、患者的

4、生活质量不高肾脏移植又存在供体短缺及肾移透析治疗的并发症多；植术后相关并发症等问题，因此及早干预甚至逆转肾脏纤维化对于防治终末期肾衰竭具有重要意义。脑肠肤是由２８个氨基酸残基组成的胃肠激素，主要由胃底黏膜的泌酸腺Ｘ／Ａ样细胞合成并分泌。脑肠化作为促生长激素释放激素内源性配体，能明显促进生长激素的分泌，并具有调控能量代谢及胃肠功能的作用。近年来大量的研究表明脑肠化还具有减轻炎症反应和抗纤维化的作用。脑肠肤在多种类型的动物纤维化模型和体外实验中均能发挥较强的抗纤维化作用。在肾脏缺血再灌

5、注模型中，脑肠肤能减輕炎症反应，减少细胞调亡，改善肾脏功能，但脑肠肤在肾脏纤维化模型中的作用机制尚不明确。Ｉ摘要目的：观察脑肠肤对单侧输尿管结扎（Ｕｎｉｌａｔｅｒａｌｕｒｅｔｅｒａｌｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，ＵＵＯ）大鼠肾间质纤维化动物模型ＲＩＦ及相关纤维化因子表达的影响；进而探讨脑肠狀抗肾脏纤维化的作用机制。实验方法：１、实验分组及模型制作将雄性ＳＤ大鼠（４０只）随机分为４组：假手术组（Ｓｈａｍ＋Ｖｅｈｉｃｌｅ），假手术组＋脑肠肤治疗组（Ｓｈａｍ＋Ｇｈ

6、ｒｅｌｉｎ），模型组（ＵＵＯ＋Ｖｅｈｉｃｌｅ），脑肠肤治疗组（ＵＵＯ＋Ｇｈｒｅｌｉｎ）。模型组及脑肠肤治巧组行左侧输尿管结扎制成大鼠ＵＵＯ。模型而假手术组大鼠仅分离左侧输尿管，不进行结扎，麻醉及其余手术步骤与模型组相同。术后１４天处死大鼠，收集肾脏标本进行相应实验指标检测。２、Ｍａｓｓｏｎ染色按常规方法行Ｍａｓｓｏｎ染色。取Ｍａｓｓｏｎ染色切片，每例切片高倍镜下（。００）观察１０个互不重叠肾小管间质视野，巧光思微镜下观察、拍照、分析。３、肾脏组织石蜡切片制作大鼠麻醉后，

7、分别用生理盐水和４％多聚甲酸溶液经也脏灌注。梗阻侧肾脏组织，于４％多聚甲酸溶液中浸泡２４小时后，按照常规石蜡包埋法制成石蜡１１１１、。标本并切片，切片厚度为３［，携片风干后备用４、免疫组化组织切片经脱蜡、水化，在惊樣酸缓冲液（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）中给予微波热修复３０ｍ一ｉｎ。适度冷却后依次给予０．３％过氧化氨溶液、山羊血清、抗、生物素化二抗和辣根酶标记链霉卵白素工作液封闭和解育。ＤＡＢ显色液显色，中性树胶封片后在显微镜下观察并拍照。５、免疫巧光ＩＩ硕壬学位论文

8、ｒｉｓ－ＥＤＴＡＬ（ＰＨ８．５）或恃樣酸缓冲液Ｏ．Ｏｌｍｏｌ／）石蜡切片脱蜡至水，在Ｔ（‘一血清封闭后滴加４Ｃ１２－２４ｈＰＢＳ中给予微波热修复，抗，赔育，溶液洗涂后滴二抗‘化Ｃ解。焚光显、、。加相应巧光，巧育微镜下观察拍照分析６、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ方法检测蛋白表达变化ｌＯＯｍ用。姐织标大鼠麻醉后处死，取梗阻侧肾脏组织约ｇ，液氮中保存备、、ＯＯＯｒｍ５Ｏｍｉｎ本经匀浆裂解