zhc116对肾间质纤维化疗效及作用机制初步研究

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1、中图分类号分类号UDC／宅372j126lO博士学位论文学校代码10533密级公珏ZHCl16对肾间质纤维化疗效及作用机制初步研究TheeffectandmechanismofZHC116onrenalintersUtialllDrosis●·⋯●1n1●作者姓名：吴林学科专业：临床医学八年制研究方向：肾脏病学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：陶立坚教授论文答辩日期：2。J弓．6．弓．答辩委员会主中南大学二零一三年五月一令一二，平血月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中

2、不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：篡盐日期：麴!墨年上月L日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：关破导师签名：逊

3、日期：皿年上月立日ZHCl16对肾间质纤维化疗效及作用机制初步研究摘要第一章ZHCll6抗UUO大鼠肾间质纤维化的疗效观察研究背景肾问质纤维化(Renalinterstitialfibrosis，砒F)是指由多种原因引起的细胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)在肾间质的过度沉积，是多种慢性肾脏病(ChronicKidneyDisease，CKD)进展至终末期肾病(End-stagerenaldisease，ESRD)的病理基础和共同通路。探讨肾间质纤维化的发生机制、研发抗肾间质纤维化的药物对慢性肾脏疾病的控制具有重要意义。ZHC．116是本课题组设计

4、的新一代抗纤维化新药。前期体外研究表明，ZHCl16具有抗肾小管上皮细胞转分化(Epithelialmesenchymaltransition，EMT)的作用，具有抗纤维化的潜能。目的观察ZHCl16对单侧输尿管结扎(UnilateralUreteralObstruction，UUO)大鼠肾间质纤维化动物模型间质损伤、纤维化、III型胶原表达的影响。方法建立UUO肾间质纤维化模型。SD大鼠(20只，每组5只)随机分为假手术组、UUO模型14天组、ZHCl16(100mg／d)治疗组、吡非尼酮(500mg／d)治疗组；于UUO术后14天留取各组大鼠梗阻侧肾脏标本，用HE和M

5、asson染色方法观察大鼠肾间质纤维化成模情况及药物疗效，免疫组化方法观察III型胶原表达。结果UUO术后14天，模型组大鼠梗阻侧肾脏肾间质损伤指数、Masson染色评分以及ⅡI型胶原表达比假手术组显著升高(p<0．05)；与模型组相比，ZHCl16和吡非尼酮治疗均能显著降低UUO2∑生剑蝗±堂僮途塞虫塞垴噩大鼠梗阻侧肾间质损伤评分、Masson染色评分和ⅡI型胶原的表达(p<0．05)；与吡非尼酮治疗组相比，ZHCll6治疗组肾间质III型胶原阳性表达面积百分比显著减少(p

6、mg／kg吡非尼酮。第二章ZHCll6对AngII刺激肾小管上皮细胞MAPK通路的影响研究背景肾素．血管紧张素．醛固酮系统(RAAS)的激活，尤其是血管紧张素II(AngiotensinII)的产生是肾间质纤维化和慢性肾脏病进展的重要介质。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen．activatedproteinkinase，MAPK)是参与多种细胞过程如分化、增殖、炎症、纤维化的重要信号转导通路。AngII可以诱导肾小管上皮细胞MAPK通路的活化，参与肾间质纤维化中的炎症、氧化应激、细胞增殖、致纤维化因子产生等发病机制。初步研究显示ZHCl16具有抗肾间质纤维化的疗效，本部分

7、将初步探讨ZHCl16抗肾间质纤维化的作用机制。目的观察ZHCl16对AngII刺激大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)MAPK通路中细胞外信号调节激酶1／2(Extracellularsignal．regulatedproteinkinasel／2，ERKl／2)通路的影响。方法培养NRK．52E细胞，设立正常对照组、AngII刺激模型组、AngII+ZHCl16治疗组、AngII+p．ERK抑制剂组。模型组予以AngII(10。7M)刺激15min；ZHCll6治疗组予以ZHCl16(50ug／m1)预处理24小时，并用A