raav2介导gdnf联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

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1、硕士学位论文论文题目rAAV2介导GDNF联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究研究生姓名韩清泉指导教师姓名沈勇伟专业名称运动人体科学研究方向运动生理生化论文提交日期2013年3月rAAV2介导GDNF联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究中文摘要中文摘要研究目的：本实验以雄性SD大鼠为研究对象，造模后应用rAAV2介导GDNF联合早期康复训练对脊髓损伤的大鼠进行实验研究，采用运动学评分、组织形态学和免疫组化等技术，通过分析脊髓损伤大鼠在不同时间点后肢运动功能的变化、损伤脊髓处GDNF的蛋白表达、运动神经元形态和数量的变化等，比较早期康复训练、

2、基因治疗以及这两种因素的联合作用对脊髓损伤大鼠恢复的影响。研究方法：本实验采用了rAAV2介导GDNF基因治疗、早期康复训练及两者联合三种方法对脊髓重物打击造模后的大鼠进行干预：雄性SD大鼠90只，随机分为假手术组（n=18）、自然愈合组（n=18）、基因治疗组（n=18）、康复训练组（n=18）、联合治疗组（n=18），其中每组按照取材时间点不同随机分为造模后7d组（n=6）、14d组（n=6）、21d组（n=6）。对基因治疗组、联合治疗组大鼠造模成功后24h注射携带有人GDNF基因的重组腺相关病毒。对康复训练组、联合治疗组大鼠在造模成功后第3d开始

3、早期康复训练。测试方法与指标：①通过BBB评分、斜板实验来评价脊髓损伤大鼠运动功能的改善。②HE染色观察损伤后大鼠脊髓运动神经元、神经胶质细胞的形态数量变化。③荧光显微镜下观察rAAV2-GDNF-GFP在损伤脊髓处的表达。④免疫组化实验采用SABC（StreptAvidin-BiotinComplex）试剂盒来检测损伤脊髓组织中GDNF的抗原分布，观察GDNF的蛋白表达。研究结果：①运动学评分得出对脊髓损伤大鼠运动功能的恢复，康复训练组的效果好于基因治疗组，且7d时有显著性差异（P<0.05），14d、21d时有非常显著性差异（P<0.01）。②HE

4、染色切片观察得出对运动神经元的保护作用，基因治疗组要好于康复训练组，且在第7d时有显著性差异（P<0.05）。③免疫组化的结果表明康复训练组的GDNF平均光密度值高于自然愈合组，且第7d时有显著性差异（P<0.05），14d、21d时有非常显著性差异（P<0.01）。④运动学评分、损伤后运动神经元存活的数量、rAAV2-GDNF-GFP感染效率及GDNF的蛋白表达，联合治疗组的效果是最好的，且与其它各组相比，在7d、14d均有显著性差异（P<0.05）。研究结论：①rAAV2-GDNF-GFP在细胞水平上具有感染293T细胞能力并且可以表达GDNF蛋白

5、，在组织水平上，损伤区脊髓组织中GDNF在转录和蛋白水平均有表达，其中14d时平均光密度值是最高的。②早期康复训练可以使大鼠后I中文摘要rAAV2介导GDNF联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究肢的运动功能得到明显的改善，在7d-14d恢复较快，并且对损伤大鼠脊髓中的GDNF表达有促进作用，在14d时效果最明显。③rAAV2介导的GDNF基因治疗能保护受损的脊髓前角运动神经元，显著提高损伤脊髓处GDNFmRNA和蛋白的表达水平，对脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复有促进作用。④联合治疗在促进大鼠后肢运动功能的恢复、对损伤脊髓前角运动神经元的保护作用及GD

6、NF在损伤脊髓区的表达效果都是最好的，多种方法联合治疗是脊髓损伤治疗的发展趋势。关键词：rAAV2；GDNF；早期康复训练；脊髓损伤作者：韩清泉指导老师：沈勇伟IIrAAV2介导GDNF联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究英文摘要ExperimentalresearchonacutespinalcordinjuryinratsbyGDNFmediatedbyrAAV2incombinationwiththeearlyrehabilitativetreatmentAbstractObjective:ChoosemaleSDratsastheexpe

7、rimentalsubject,useGDNFmediatedbyrAAV2jointearlyearlyrehabilitationtrainingonacutespinalcordinjuryinratsaftertheinjury,adoptthekinematicsscores,histomorphologyandimmunohistochemicaltechniques,comparedtheeffectsonSCIofearlyrehabilitativetreatment,genetherapyandcombinedtherapythro

8、ughanalysisingthechangesoftherats’movementfunct