pten甲基化在骨肉瘤发生中的作用及5-aza-cdr去甲基化对其mg-63 细胞生物学行为的影响

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1、中图分类号盟3墨!!UDC610博士学位论文学校代码!Q533PTEN甲基化在骨肉瘤发生中的作用及5．Aza．CdR去甲基化对其MG．63细胞生物学行为的影响EffectonPTENMethylationinOsteosarcomaOccu--rringandInfluenceonCytologyBehaviorofCellLineMG一63Demethylatedby5-Aza--CdR作者姓名：罗一学科专业：临床医学研究方向：外科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：邓展生教授论文答辩日期加，3，F、砷．答辩委

2、员会主席趟一中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其它已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：竺年二月!日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分

3、内容，可以采用复印、缩印或其他手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信，gN．务。作者签名：导师签名：毖期：三二三年二-一月!日博士学位论文中文摘要骨肉瘤(Osteosarcoma)是起源于间胚叶组织的最常见的原发性恶性骨肿瘤，其生物学性状极为复杂，有关其发病机理仍未完全清楚，诊断和治疗的方法依然有限。现代医学认为，肿瘤的发生是一个多阶段、多因素和多基因综合作用的过程，其生物学本质是细胞内遗

4、传调控和表观遗传调控的紊乱与失调。近年来以不基于基因序列改变为特征的表观遗传调控在肿瘤发生中的作用各受关注，其主要表现形式是DNA甲基化，它可以直接导致相关基因的表观遗传转录沉默。基因DNA甲基化有助于肿瘤发生的早期预测及预后评估。癌基因的低甲基化、抑癌基因的高甲基化和整体基因组的低甲基化是DNA甲基化失衡状态的三种经典现象，其中尤以抑癌基因的高甲基化与肿瘤的关系最为密切，它是抑癌基因转录失活的主要途径，甚至可能成为调控基因转录的唯一的机制。PTEN是迄今为止发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，是抑癌基

5、因家族中继P53发现后在人类肿瘤中突变及缺失率最高的又一明星分子。PTEN具有抑制肿瘤生长、促进细胞凋亡及抑制血管生成等作用，能负性调控P13K／AKt及抑制MAPK的信号转导通路对肿瘤产生影响。已有研究表明在很多人类恶性肿瘤中都存在PTEN的异常甲基化，但关于其与骨肉瘤的关系却鲜见报道。了解骨肉瘤中PTEN的甲基化状态，对寻找骨肉瘤早期诊断可能的分子标志物具有重要的临床意义。II博士学位论文中文摘要由于DNA甲基化不涉及DNA序列改变，因此，它是一个可逆的表观遗传学修饰过程。任何一个基因的甲基化状态是一个甲基化

6、和去甲基化的动态平衡过程，处于甲基化异常的抑癌基因对阻断其DNA甲基化的药物非常敏感，临床上可利用这种敏感性进行基因治疗。5-Aza-CdR是已被美国FDA批准应用于骨髓增殖异常综合征及急性粒细胞白血病临床治疗的去甲基化药物，它能在体内外激发DNA的去甲基化过程，导致被甲基化沉默的抑癌基因持续激活。目前已有5-Aza-CdR作用于乳腺癌、非小细胞肺癌及前列腺癌等肿瘤的相关研究，但其与骨肉瘤的关系的研究却还是空白。因此，探讨5-Aza-CdR对肿瘤的去甲基化作用机制对防治骨肉瘤亦具有重要的临床意义。本研究分成三个部

7、分。第一部分，通过MSP技术检测骨肉瘤标本中PTEN的甲基化状态并将其与患者的临床病理参数结合进行分析，以期探讨PTEN甲基化在骨肉瘤发生中的作用及其相关预后影响因素，为探寻骨肉瘤早期诊断可能的分子靶标提供依据；第二部分，通J,过_MSP技术对三株人骨肉瘤细胞MG．63、SAOS．2和U2．OS进行筛选，选取其中PTEN完全甲基化的一株细胞进行后续细胞学功能实验，以5-Aza．CdI时其进行去甲基化干预，探讨5．Aza．CdR作用的最佳浓度与时间、细胞的生物学行为及甲基化状态，为阐明5．Aza．CdR的体外去甲基

8、化作用机制提供实验依据；第三部分，建立人骨肉瘤MG．63细胞荷瘤裸鼠模型，以5．Aza-CdR经尾静脉注射去甲基化干预4周，观测移植瘤体积生长的动态变化及检测移植瘤的病理形态学、PTEN蛋白表达及其甲基化情况，明确5．Aza．CdR的体内去甲基化作用机制。III博士学位论文中文摘要第一部分骨肉瘤中PTEN的甲基化情况及其与相关临床病理参数的关系目的明确骨肉瘤中抑癌基因PT