mtor信号通路对人类鼻咽癌细胞增殖的调控作用

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1、温州医学院硕士学位论文答辩委员会主席：扬蕉蕉逝、江盔堂瞪届箍三匡医里皇咽噬型答辩委员会成员：睦建福渔趔匡堂瞳阻屋筮二医院戛昱咽噬型论文答辩同期：2013年5月19日2温州医学院硕士学位论文目录一、英文缩写注解二、摘要1．中要摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52．英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7三、正文1．前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、133．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯164．分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯196。参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26六、综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27七、学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45八、关于学位论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45温州医学院硕士学位论文mTORNPCSDS-PAGECSCSCIDFACSMACSAML

3、SPcellSABCLRCBrdULCMAPBSCTALDH英文缩写注解mammaliantargetofrapamycin哺乳动物雷帕霉素靶点nas叩haryngealcareinoma鼻咽癌聚丙烯酰胺凝胶电泳cancerstemeel1肿瘤干细胞severecombinedimmunedeficiency重症免疫缺陷fluorescenceactivatedcellsorting荧光激活细胞分离法magneticactivatedcellsorting磁激活细胞分离法acutemyeloidleukemia急性白血病sidepopulationcells侧群细胞ATP—bind

4、ingcassetteATP一结合盒label—retainingcell标记阻滞细胞bromodeoXyuridine溴脱氧尿苷LaserCaptureMicrodissection激光分割收集器autoperipheralbloodstemeelltransplantation外周血干细胞移植aldehydedehydrogenase醛脱氢酶4温州医学院硕士学位论文mTOR信号通路对人类鼻咽癌细胞增殖调控作用的研究中文摘要目的：通过检测mTOR(mamma]iantargetofrapamycin)相关信号分子在鼻咽癌细胞中的表达，探讨mTOR信号通路在鼻咽癌细胞中是否激活，进

5、一步用mTOR抑制剂雷帕霉素探测其对鼻咽癌原代细胞中蛋白表达及细胞增殖的调控作用。方法：1．利用原代培养的人类鼻咽癌细胞，采用Westernblot检测人类鼻咽癌细胞中mTOR信号通路中四种蛋白s6、mTOR、pS6和pmTOR的活化情况。其中pS6和pmTOR是mTOR信号的活化形式。2．免疫荧光细胞化学检测mTOR和pmTOR在鼻咽癌细胞中的表达部位。3．采用Westernblot方法检测不同浓度雷帕霉素作用24小时后细胞中s6、pS6、mTOR、pmTOR蛋白的表达量。4．CCK8检测雷帕霉素或对照组作用24小时后细胞的凋亡情况。5．统计学处理：不同浓度雷帕霉素对细胞生长的抑

6、制采用One—wayANOVA方差分析，多重比较采用LSD法。结果：1．Westernblot检测结果显示S6、pS6、roTOR、pmTOR四种蛋白在原代培养的人类鼻咽癌细胞中呈阳性表达。免疫荧光进一步证实roTOR和pmTOR两种蛋白主要表达于鼻咽癌细胞浆中。2．Westernblot检测结果显示，当雷帕霉素浓度分别为O，30，50，100nmol／L时，随着药物浓度的增加，mTOR和pmTOR两种蛋白的表达量逐渐下降；同样，当雷帕霉素浓度为0，20，50，100nmol／Ll对，S6和pS6两种蛋白的表达量随着药物浓度增加逐渐下降。温州医学院硕士学位论文3．当雷帕霉素浓度分别

7、为O、5、10、30、40、50、lOOnmol／L时，随着药物浓度的加大，相应的细胞存活率逐渐下降。但当雷帕霉素浓度超过100nmol／L时，随着药物浓度增加，其对鼻咽癌细胞增殖抑制的影响没有明显变化。通过凋亡实验，我们可以明显地看出雷帕霉素浓度分别为0nmol／L、1000nmol／L时，鼻咽癌细胞的存活率存在较大差异。结论：1．Westernblot检测结果显示mTOR信号通路中S6、pS6、mTOR、pmTOR四种蛋白在鼻咽癌中均呈阳性表达，从而说明mTOR信