应用msap技术对脐橙品种进行dna甲基化分析

《应用msap技术对脐橙品种进行dna甲基化分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、中国农业科学2005,38(11):2301-2307ScientiaAgriculturaSinica应用MSAP技术对脐橙品种进行DNA甲基化分析洪柳，邓秀新（华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，国家柑橘育种中心，武汉430070）摘要：应用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术对24个脐橙品种胞嘧啶甲基化模式和程度进行评估。结果表明，脐橙基因组的CCGG序列中检测到4.7%～15.0%的DNA发生甲基化；18对扩增引物有10对显示有多态性，总共得到639条带，其中43条带为甲基化多态性带，平均甲基化多态性（P）比率达6.7%。结果显示DNA甲基化在脐橙中发生频繁，且品种

2、之间的甲基化模式存在较大差异，脐橙CCGG序列中胞嘧啶甲基化外部（15.0%）多于内部（4.7%）。本文首次运用MSAP技术对脐橙品种进行胞嘧啶甲基化分析表明，使用MSAP检测脐橙品种多态性非常有效。关键词：脐橙；DNA甲基化；MSAPAnalysisofDNAMethylationinNavelOrangesBasedonMSAPMarkerHONGLiu,DENGXiu-xin(NationalKeyLaboratoryofCropGeneticImprovementandNationalCenterofCitrusBreeding,HuazhongAgricultural

3、University,Wuhan430070)，Abstract:Theextentandpatternofcytosinemethylationin24navelorangecultivarsgenomeswereassessedbyusingthetechniqueofmethylation-sensitiveamplifiedpolymorphism(MSAP).4.7%-15.0%DNAmethylationeventsweredetectedintheCCGGsequenceofnavelorangegenomes.Inall,639fragmentswereampl

4、ifiedusing18pairsofselectiveprimers,and10ofthe18primersshowed43DNAmethylationpolymorphisms.Theaverageproportionofpolymorphism（P）was6.7%.TheresultsdemonstrateDNAmethylationeventsoccurfrequentlyinnaveloranges；methylationpatternsvaryamongthecultivars,andtheexternalcytosinemethylationoftheCCGGse

5、quence（15.0%）ismorethaninternalone(4.7%).ThispaperisthefirsttimetoanalysecytosinemethylationinnavelorangesusingMSAP,indicatingMSAPtechniqueisefficientfordetectionofcytosinemethylationinnavelorangegenomes.Keywords:Naveloranges[Citrussinensis(L.)Osbeck];DNAmethylation;MSAP柑橘是果树中最易发生芽变的种类之一，目前生

6、种（品系），发现存在很小的分类学差异和遗传学多[1～7]产上主栽的许多优良品种或品系都是通过芽变选种获态性。得。大多数脐橙品种（品系）是华盛顿脐橙（WashingtonDNA甲基化是一种表观遗传（epigenetic）现象，navelorange，简称华脐）的突变体或珠心苗变异。世即在发育过程中，虽然基因表达调控发生改变，但核界柑橘进出口贸易中，甜橙占47%，且脐橙是甜橙中苷酸序列没有变化，它可以遗传，也可能发生逆转（脱[8]主要的贸易对象。因此，具有特殊性状的脐橙芽变的甲基化）。在高等植物中，胞嘧啶甲基化在基因表[9～11]挖掘对于新品种的选育和占据柑橘市场都非常重要。达调控

7、中扮演了很重要的角色。检测DNA甲基但是，依据形态学来鉴别脐橙品种十分困难。早期使化的方法有多种，MSAP（methylation-sensitive用同工酶、RFLP、RAPD和ISSR鉴定和区别脐橙品amplifiedpolymorphism，甲基化敏感扩增多态性）技收稿日期：2005-06-28基金项目：国家自然科学基金及博士点基金项目（30471201）资助作者简介：洪柳（1978-），女，浙江义乌人，博士研究生，主要从事脐橙分子标记的研究。E-mail:ganju@webmail.