cripto-1 sirna对食管癌ec9706细胞cripto-1表达的影响

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster(doctor)InfluenceofCripto--1siRNAonGeneExpressionofCripto-·1inEsophagealCarcinomaCellLineEC9706By：ZhaoxiaXuSupervisor：Prof．ShengleiLiandHongtaoWenPathology＆Pathophysi0109yBasicMedicalCollegeMarch2013原创性

2、声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：彳等翻k日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或

3、部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑少bl；Jc；学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：矛嘲k日期：年月日摘要Cripto一1siRNA对食管鳞癌EC9706细胞Cripto一1表达的影响硕士研究生：徐朝霞导师：李晟磊副教授温洪涛教授郑州大学基础医学院病理学教研室河南省肿瘤病理重点实验室河南郑州450052摘要我国是食管癌的高发区，食管癌的发病率居世界首位。近年来，随着手术切除、放射治疗、化

4、学治疗及其它综合性治疗措施的应用，食管癌在治疗效果方面虽然有了一定的进展，但总体来说并不十分理想。因此，进一步探讨食管癌的发病机制，寻求更有效的治疗手段是当前临床研究的热点课题之一。Cripto．1是表皮生长因子(EGF)基因家族成员之一员，是一类糖基磷脂酰基醇(glycosy-1phosphatedylinositol，GPI)锚定膜蛋白，具备调节细胞大的分化及早期胚胎的发育功能。Cripto．1主要在胚胎早期发育阶段表达，在细胞发生了转化或恶变的时候又重新表达。大量的研究表明，Cdpto．1在鼻咽癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤及口腔鳞癌等多种

5、恶性肿瘤过表达，而与肿瘤细胞的分化、增殖、迁徙等密切相关。所以，Cripto．1可能是一种新的肿瘤特异性标志，靶向阻断Cripto．1治疗肿瘤成为当前研究的热点。然而关于Cripto．1在食管癌中可能发挥作用的研究国内外少见文献报道。Cripto．1和食管癌的发生发展是否有相关性，抑制Cripto．1表达对食管癌的发病机制有何影响是本研究需要探讨的核心。本研究采用RNA干扰技术，沉默食管鳞癌EC9706细胞中Cripto．1的表达，采用免疫细胞化学及Westernblot检测细胞观察Cfipto．1蛋白的表达，采用原位杂交及RT-PCT检查

6、细胞Cripto．1mRNA的表达，采用Boydenchamber检查细胞侵袭力的变化，为寻找食管鳞癌的分子靶向治疗途径提供一定的实验依据及理论基础。摘要材料和方法1．细胞培养：人食管鳞状细胞癌EC9706细胞株在37"C、5％C02孵育箱中培养。2．选择干扰靶点，设计合成Cripto．1siRNA，以RNAi．Mate转染试剂介导Cripto．1siRNA转染食管鳞癌EC9706细胞，分别转染24、48及72h，同时设立空白对照(无任何处理)组及无关对照组(转染非特异性siRNA)。3．采用免疫细胞化学法及Westernblot检测各组C

7、ripto一1蛋白的表达。4．采用原位杂交及RT-PCR检测各组Cripto．1mRNA的表达。5．采用Boydenchamber侵袭小室检测各组细胞的侵袭力。6．统计学处理：所有数据天统计均采用SPSS17．0统计软件，统计学数据用均数士标准差(X士S)表示，两组均数比较用t检验(t．test)；多组均数间的比较采用单因素方差分析(one．wayANOVA)，多组均数间的两两比较采用LSD方法，检验水准a=0．05。结果1免疫细胞化学及Westernblot结果与各对照组相比，各转染组细胞Cripto．1蛋白的表达均有所降低，差异均有统计

8、学意义(P