cb-aβ抗体偶联物经鼻入脑靶向作用的研究

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1、硕士学位论文学校代码：10023学号：$2010005063CB—AB抗体偶联物经鼻入脑靶向作用的研究所院：姓名：导师：学科专业：研究方向：完成日期：北京协和医学院基础学院刘建玉梁平教授病理学与病理生理学神经退行性疾病发病机制及防治2013年5月北京协和医学院硕士研究生论文目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ll实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14第一部分CB—AB抗体偶联物经鼻入脑效率的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一、实验方案⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第二部分AD模型鼠的基因型和病理学特点熊赶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一、实验方案⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯30三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36第三部分CB—AB抗体抑制AB斑块形成的动物体内试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一、实验方案⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42二、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43三、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48807234567¨¨日仃～明～～献历～声结论文简谢性考人创小讨参个致原北京协和医学院硕士研究生论文摘要阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是一种以老年人记忆力减退和认知功能障碍为主要临床特征

4、的中枢神经系统退行性疾病。老年斑(senileplaque，SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillarytangles，NFT)和神经突触减少或神经元丢失是AD的主要病理特征，病变主要累及海马和皮层。其中，老年斑的主要成分是p一淀粉样多肽(beta．amyloidpeptide，AB)聚集形成的纤维，而AD纤维被认为是导致神经元损伤及认知功能障碍的主要致病物质。因此，阻止A13多肽聚集及清除大脑病变区已形成的AB多肽可能成为AD治疗的突破口。多项动物实验表明，通过外周给予抗AD抗体能有效降低脑内A13沉积的水平并减轻认知功能的损害。但是血脑屏障的阻碍使得外周抗体很难穿过血管进入大脑，

5、因而限制了抗体清除AB淀粉样斑块的效率，使其应用潜力受到限制。而鼻脑之间直接通路的存在使得通过鼻腔向脑内递送抗体类的大分子物质成为可能。近年来研究发现，霍乱毒素B亚单位(CholeraToxinBsubunit，CB)能与神经细胞膜表面的神经节苷脂(GMl)配体特异结合，经嗅神经细胞轴浆转运至大脑内。本研究将A13多肽抗体与CB偶联，利用CB与GMl受体配体结合主动转运的特性，将抗体带入脑内。CB与AB抗体偶联及其入脑后是否具有能发挥有效的生物学作用，尚未见报道。本课题组前期研究中己证明了霍乱毒素B亚单位与A13多肽抗体形成的偶联物(CB．IgG)通过鼻腔给药后能绕过血脑屏障高效进入正常小鼠脑

6、内。但此偶联物CB．IgG是否能高效进入痴呆小鼠脑内发挥生物学效应尚不清楚。在前期研究基础的上，本研究将A13多肽抗体(IgG)与CB偶联，滴鼻后观察是否能够有效的进入转基因模型小鼠脑内，发挥抗体的生物学效应，抑制小鼠脑内Ap沉积和淀粉样斑块的形成。本课题的研究内容主要包括三个部分：CB．A13多肽抗体经鼻入脑效率的研究，转基因痴呆小鼠的基因型和病理学特点鉴定，CB．A13多肽抗体抑制A13斑块形成的动物体内试验。第一部分：CB．AB多肽抗体偶联物经鼻入脑的效率研究。方法：分别采用改良过碘酸钠法及戊二醛两步法制备CB与A13多肽抗体的偶联物CB．IgG，选择最佳的偶联方法用于后续实验。鼻腔给予

7、C57小鼠CB．IgG后，用间接ELISA法测定不同时间点小鼠脑内抗体量。16只C57小鼠分为CB．IgGIN组、IgGIV组和正常对照组，抗体给予3h后用间接ELISA法测血清和脑区抗体量。结果：选择过碘酸钠法制备偶联物CB—IgG，鼻腔给予C57小鼠，0．3h后即可在脑内检测到AB抗体的存在(P