rna干扰抑制ercc1对非小细胞肺癌化疗敏感性的影响[1]

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1、３２３２重庆医学２０１１年１１月第４０卷第３２期·论著·＊ＲＮＡ干扰抑制ＥＲＣＣ１对非小细胞肺癌化疗敏感性的影响宋志雨，周航△（遵义医学院附属医院肿瘤二科，贵州遵义５６３０００）摘要：目的探讨利用ＲＮＡ干扰技术沉默切除修复交叉互补基因组１（ＥＲＣＣ１）表达对非小细胞肺癌耐药细胞株顺铂化疗敏感性的影响。方法设计并合成３段靶向人的ＥＲＣＣ１基因的小分子干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ），构建携带ＥＲＣＣ１－ｓｈＲＮＡ的重组质粒表达载体，采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染入人肺癌细胞株Ａ５４９／ＤＤＰ，荧光镜下观察并测定转染效率；应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检

2、测转染前后ＥＲＣＣ１ｍＲＮＡ的表达情况；应用四甲基偶氮唑蓝比色法（ＭＴＴ）检测干扰ＥＲＣＣ１后Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对ＥＲＣＣ１的ｓｉＲＮＡ后，转染组Ａ５４９／ＤＤＰ细胞内ＥＲＣＣ１ｍＲＮＡ表达均下降，转染后肺癌Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对顺铂敏感性增加。结论利用ＲＮＡ干扰技术能够筛选出高效的特异阻断ＥＲＣＣ１基因表达的ｓｉＲＮＡ；ＥＲＣＣ１基因表达下调能够增加肺癌Ａ５４９／ＤＤＰ细胞对顺铂的敏感性，部分逆转耐药。关键词：ＲＮＡ干扰；癌，非小细胞肺癌；顺铂；切除修复交叉互补基因组１；Ａ５４９／ＤＤＰ细胞ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７

3、１－８３４８．２０１１．３２．００４文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－８３４８（２０１１）３２－３２３２－０４ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄＥＲＣＣ１ｇｅｎｅｏｎｔｈｅｃｈｅｍｏ－ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ＊ＳｏｎｇＺｈｉｙｕ，ＺｈｏｕＨａｎｇ△（ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＺｕｎｙｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｚｕｎｙｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５６３０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃ

4、ｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｐｌａｔｉｎｕｍ－ｂａｓｅｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｓｉｌｅｎｃｉｎｇｅｘｃｉｓｉｏｎｒｅｐａｉｒｃｒｏｓｓｃｏｍ－ｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ１（ＥＲＣＣ１）ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｕｓｉｎｇＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｉｎｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ（ＮＳＣＬＣ）ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｅｌｌｌｉｎｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｒｅｅｓｉＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｔａｒｇｅｔｉｎｇＥＲＣＣ１ｇｅｎｅｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ．Ｒｅｃｏｍｂ

5、ｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗｈｉｃｈｃａｒｒｙｉｎｇＥＲＣＣ１－ｓｈＲＮＡｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＡ５４９／ＤＤＰｃｅｌｌｓｗｉｔｈＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００．Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｉｎｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＲＣＣ１ｍＲＮＡｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）．Ｔｈｅｃｈａｎｇｅｏｆｃｉｓｐｌａ

6、ｔｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｆｔｅｒｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｔｅｓｔｂｙＭＴＴａｓｓａｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｆｔｅｒｔｒａｎｓ－ｆｅｃｔｉｏｎｏｆＥＲＣＣ１－ｓｉＲＮＡ，ｔｈｅＥＲＣＣ１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎＡ５４９／ＤＤＰｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｌｌｒｅｄｕｃｅｄ．ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎｏｆＡ５４９／ＤＤＰｃｅｌｌｌｉｎｅｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎｏｆＡ５４９／ＤＤＰｃｅｌｌｌｉｎｅｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ．

7、ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＨｉｇｈｌｙｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉＲＮＡｔａｒｇｅｔｉｎｇＥＲＣＣ１ｇｅｎｅｃａｎｂｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｓｃｒｅｅｎｅｄｂｙＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｃｈ－ｎｉｑｕｅ．ＳｅｌｅｃｔｉｖｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆＥＲＣＣ１ｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏｃｉｓｐｌａｔｉｎｉｎＡ５４９／ＤＤＰｃｅｌｌａｎｄｃａｎｐａｒｔｌｙｒｅｖｅｒｓｅｔｈｅｃｉｓｐｌａｔｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｈｕｍａｎｃｉｓｐｌａｔｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｌｕｎｇａｄｅｎｏ－ｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌ