鸦胆子素d对hpv16感染细胞的作用及其可能机制

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1、温州医学院硕士学位论文论文题目：鸦鲤王塞Q挝婪瞍!鱼盛鎏细胞的佳旦壁墓亘篚扭剑答辩委员会主席：奎丝丞麴援答辩委员会成员：赵至招麴拯圃题熬援温州医学院硕士学位论文中英文对照表中文摘要Abstract引言1．材料和方法～一⋯目录1．1材考十⋯⋯⋯⋯一⋯一⋯⋯⋯1．2方法～一⋯2．结果一～一一3．分析与讨论～一4．结论⋯⋯一一⋯一一⋯～～一一一10———————-—-——10—12_-———-—-—-—-———————_—-—-—·—————————-—-—————-——————————·-16参考文献一⋯一⋯～一一附录一～一～一至￡谢～

2、一综述～一～一～一一21～一一28B--一31---32—————-——————————————33勇孓考文献⋯一⋯⋯～⋯⋯一～一⋯⋯⋯～⋯～一37独创性声明——————————————————————_-———————-—-—————————_—————————_————————————————————————392温州医学院硕士学位论文缩略词表(按字母顺序)-：：—_：_!=-———___——____'?_，_!__，_——______·____--l_____—-——-—____-——__一_一缩略词英文全称中文全称BDFBS

3、EDTADMSOPBSrpmEct1／E6E7FITCPIMTT0DbpcDNAmRNARNAmlumol／LPCRRT-PCRBruceineDFetalbovineserumethylenediaminetetraaceticaciddimethylsulfatephosphatebuffersalineRevolutionperminuteHPVE6／E7immortalizedhumanectocervicalcellineFluoersceine—isothiocyanate—conjugated鸦胆子素D胎牛血清乙二胺四

4、乙酸二甲基亚砜磷酸盐缓冲液每分钟转数人宫颈鳞状上皮永生化细胞系异硫氰酸荧光素共价连接PropidiumIodide碘化丙锭MethylthiazolyltetrazoliumOpticaldensitybasepairComplementeryDNA噻唑蓝光密度碱基对互补DNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸ribonucleiCacidmilliterMicromolarper1itrepolymerasechainreactionReversetransriptasePCR核糖核酸毫升微摩尔每升聚合酶

5、链反应逆转录聚合酶链反应FQ—PCRRealtimeQuantitativePCR实时荧光定量聚合酶链反应3温州医学院硕士学位论文鸦胆子素D对HPVI6感染细胞的作用及其可能机制中文摘要目的研究鸦胆子素D(bruceineD，肋)对高危型人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)16型感染细胞人宫颈永生化Ectl／E6E7细胞系是否具有增殖抑制作用，及其可能机制，为鸦胆子素D应用于癌前病变及癌症治疗领域提供实验依据，为临床综合治疗提供新的思路。方法1．以人宫颈鳞状上皮永生化细胞系(Ectl／E6E7)作为HPV

6、l6型感染的宫颈癌前病变的体外实验模型，用l，5和10umol／L鸦胆子素D分别体外作用于细胞24、48、72h，倒置显微镜下观察细胞形态学改变；2．采用MTT法测定鸦胆子素D对Ectl／E6E7细胞体外培养增殖活性改变；3．采用细胞周期法测定鸦胆子素D对Ectl／E6E7细胞生长周期的影响；4．采用Hoechst33258细胞核荧光染色法观察鸦胆子素D作用后Ectl／E6E7细胞凋亡情况；5．采用AnnexinV-FITC／PI双染色法检测不同浓度鸦胆子素D作用后Ectl／E6E7细胞凋亡率的变化；6．实时荧光定量PER检测Ect

7、l／EBE7及Caski两种细胞经不同浓度鸦胆子素D作用后HPVl6E6、E7基因mRNA的表达。结果1．倒置显微镜观察到不同浓度鸦胆子素D对Ectl／E6E7细胞作用不同时间后细胞有形态学变化，且随着时间延长、浓度增加，变化更加明显；2．MTT结果显示Ectl／E6E7经l、5、10、15、30umol／L鸦胆子素D作用24、48、72h后，具有明显的抑制体外增殖作用，抑制呈时间和浓度的依赖性，差异有统计学意义(P

8、33258细胞核染色法显示Ectl／E6E7细胞经5umol／L鸦胆子素D体外作用48小时后，细胞发生凋亡，可观察到凋亡小体产生。，’5．流式细胞仪检测显示，各实验组细胞经鸦胆子素D作用48小时后，细胞凋仁率分别为(6．25±0．76