雷帕霉素联合顺铂治疗人骨肉瘤细胞的实验研究

《雷帕霉素联合顺铂治疗人骨肉瘤细胞的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheexperimentalresearchofRapamycincombinedcisplatintotreathumanbonesarcomacellsByMaJun-jieSupervisor：ProfPiGuo-fuOrthopedicstheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouuniversityApril2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师

2、的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者鸟俺奠日期：力鸦年上月；J日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检

3、索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：鸟气乞文日期：汐／乡年』月弓／日摘要雷帕霉素联合顺铂治疗人骨肉瘤细胞的实验研究研究背景研究生：马俊杰导师：皮国富郑州大学第一附属医院骨科郑州450052摘要骨肉瘤是骨科常见的恶性肿瘤，其主要特点就是骨肉瘤细胞中可以见到骨样基质。骨肉瘤主要见于青少年，其累及范围主要在长骨的干骺端。肉眼观骨肉瘤呈鱼肉状，瘤体呈梭形，在骨组织

4、中累及范围较广，包括骨膜、皮质和髓腔。据分析，如果直接进行肿瘤的切除，而不配合放疗、化疗等方法，则其生存率不足五分之一。所以，目前在行保肢手术的同时联合应用顺铂(DD只)、甲氨蝶呤、阿霉素、异环磷酰胺等化疗方法，患者的预后得到了极大的提高，5年生存率明显提高，但这仅仅见于早期没有发生肺转移的患者。但在实际情况下，有多达30％的病人会发生肺转移。对于这一部分患者，其术后放化疗往往效果欠佳，目前其预后仍然较差。近年来随着治疗药物的不断研究，学者们发现了很多具有良好抗肿瘤作用的药物，如雷帕霉素(rapamycin)、色素上皮衍生

5、因子(pigmentepithdium．derivedfavor，PEDF)、双膦酸盐等。雷帕霉素是目前常用的一种抗生素，起初发现其还有抗真菌的作用，后来又发现了其免疫抑制的作用，所以这十几年来一直作为免疫抑制剂而使用。近年来研究发现，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin，mTOR)可以抑制肿瘤的增殖，促进肿瘤凋亡。体外靶向抑制nlToR信号也能抑制增殖同时诱导凋亡，目前，国摘要内外还未见有文献报道雷帕霉素联合顺铂来治疗骨肉瘤。本实验主要通过比较雷帕霉素联合顺铂对人骨肉瘤细胞株MG．

6、63增殖、凋亡的影响，并进一步探讨雷帕霉素联合顺铂抑制骨肉瘤细胞增殖、促进骨肉瘤细胞凋亡的可能机制，为骨肉瘤靶向治疗提供可靠的实验依据。目的比较雷帕霉素联合顺铂与单用雷帕霉素或单用顺铂对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。并进一步探讨雷帕霉素联合顺铂治疗骨肉瘤的可能机制。材料与方法1．材料人骨肉瘤细胞MG．63，10％胎牛血清，含双抗高糖DMEM，37。C5％C02培养箱。顺铂，雷帕霉素，AnnexinV凋亡试剂盒(BD)，O．25％胰蛋白酶，MTT，DMSO。2．方法实验分为4组：空白组、阳性药1组、阳性药2组、治疗组。顺铂浓

7、度均为10pg／m1．雷帕霉素浓度为20pg／ml，阳性药1组加入RAPA20pg／ml，阳性药2组加入DDPIopg／ml，治疗组加入RAPA2099／ml并DDPIopg／ml，空白组加入等量生理盐水，均培养24h后进行检测。3．骨肉瘤细胞的增殖抑制率的检测取对数生长期的MG63细胞，接种于96孔细胞培养板中，每孔加100pl细胞悬液。分4组，每组6个孔。放置于37。C恒温5％C02恒温箱内培养过夜。分11摘要别加入三种不同药物，24h后，每孔加入20山的MTT(5mg／m1)，待其反应4h。去除培养液，PBS洗涤一遍

8、，每孔加入150}tl的DMSO，振荡10min，在酶标仪上490nm测定吸光度值。流式细胞术检测凋亡取对数生长期的MG63细胞，接种于12孔细胞培养板中。分4组，每组3个孔。放置于37。C恒温5％C02恒温箱内培养过夜。分别加入不同药物刺激，药物处理24h后，各组细胞制成单细胞悬液于500斗1缓冲液中