血小板蛋白酶激活受体-1激活在诱导结肠癌细胞sw620细胞上皮-间质转化的作用和机制

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2、加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：五，，．够复、导师签章名污刎z>¨月1日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文血小板蛋白酶激活受体一l激活在诱导结肠癌细胞SW620细胞上皮一间质转化的作用和机制前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1／日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘l8附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。20讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘31参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31综述血小板在肿瘤进展中的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。51个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。52

4、中文摘要血小板蛋白酶激活受体一1激活在诱导结肠癌细胞SW620细胞上皮一问质转化的作用和机制摘要结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，而区域淋巴结或远处转移常导致治疗失败。肿瘤细胞发生上皮一间质转化(epithelialmesenchymaltransition，EMT)是进入血管、淋巴管转移的首要步骤。诱导EMT的细胞因子和转录因子有Snail、Twist、TGF—p、Tiaml等。其中，TGF—p是EMT最主要的诱导因子之一。与肿瘤转移的关系最为密切。近年来，血小板与肿瘤进展的关系引人注目。血小板表面蛋白激活受体(Proteinase．ac

5、tivatedreceptor，PAR-1)活化后可激活Q颗粒，在肿瘤进展过程中有着非常重要的意义。但目前尚不清楚血小板PARl激活是否诱导结直肠癌EMT。目的：探讨血小板蛋白酶激活受体．1激活在结肠癌细胞SW620细胞上皮一间质转化中的作用并探讨其机制。方法：l用梯度浓度(09M，1¨M，3pM，59M，7“M，9pM，101xM)的血小板PARl激动剂(TFLLR-NH2)处理SW620细胞，用MTT法检测SW620细胞的增殖情况。用梯度浓度(0pM，1}lM，3pM，5jaM，79M，99M)的血小板PARl激动剂(盯UR-NH2

6、)激活血小板，用流式细胞学技术检测血小板表面的CD62P来判断血小板的活化程度。2实验分组：①未激活血小板悬液100／．tL+SW620细胞(实验对照组)②激活血小板悬液100肛L+SW620细胞(实验对照组)③激活血小板上清100}tL+SW620细胞(实验组)@TGF．B129L+SW620细胞(阳性对照组)⑤TFLLR-NH2O．04}tL+SW620细胞(单纯激动剂组)⑥培养基100}tL+SW620细胞(阴性对照组)。按照实验分组，24孔板培养24小时后PathScan％MTDuplexIFKit染色，激光共聚焦显微镜下观察S

7、W620细胞E。cadherin、Vimentin表达情况。3实验分组：①未激活血小板悬液400／aL+SW620细胞(实验对照组)②激活血小板悬液400p．L+SW620细胞(实验对照组)③激活血小板上清中文摘要4001上L+SW620细胞(实验组)④TGF．B120I．tL+SW620细胞(阳性对照)⑤TFLLR-NH20．49L+SW620细胞(单纯激动剂组)⑥培养基400／aL+SW620细胞(阴性对照)。按照实验分组，6孔板培养24小时后westemblot检测SW620细胞E．ca曲erin、Vimentin、Smad4的表

8、达。4ELISA法(酶联免疫吸附实验法)检测梯度浓度(0l-tM，1脚，39M，5“M，7p．M，99M)的PARl激动剂(TFLLR-NH2)激活血小板后TGF—B1释放量。结果：1MTT实验：各个不同浓