血小板蛋白酶活化受体-1激活后下调结肠癌细胞mir-200b的表达

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否研究生签师签章：参浮二级学院河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。

2、研究生签名导师签章．番蓐Qjl9年月日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文血小板蛋白酶活化受体．1激活后下调结肠癌细胞miR-200b的表达前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯芍材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29综述微小RNA和肿瘤的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50中文摘要IIllIIIlUIIJIlIJIIIIIIIl血小板蛋白酶活化受体．1激活后下调结肠癌笺旦跚j；18J表达摘要目的3结直肠癌是人类常见的恶性肿瘤之一，据全球癌症统计，其死亡

4、率在恶性肿瘤中排第四位。在我国，结直肠癌的发病率和死亡率呈逐年增高趋势。转移是恶性肿瘤致死的主要原因。结直肠癌是一类上皮来源的恶性肿瘤。越来越多的研究显示，上皮．间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，聊胛)是上皮来源肿瘤转移的首要步骤。微小RNA是一类近十年来备受关注的广泛存在于真核生物及病毒中的非编码小分子RNA，其大小约22个核苷酸。成熟的微小RNA通过与靶mRNA的3’端非编码区完全或不完全互补结合，在转录后水平调控基因的表达，调控细胞的多种生物学行为，与肿瘤的发生发展密切相关。而miR-200家族是一类重要的上皮．间质转

5、化(EMT)调控因子，TGF．131和ZEBl／2是其蕈要的靶基因。临床上发现，晚期结直肠癌患者往往合并血小板增多症。早期研究发现，血小板也能促进肿瘤转移。最新研究显示，血小板通过TGF—B1途径参与了EMT的发生。众所周知，血小板a颗粒富含TGF．B1，而PARl是人血小板表面的一种蛋白酶活化受体，血小板PARl激活后Q颗粒可能释放大量细胞因子(如TGF．p1)影响肿瘤血管生成和转移。血小板和miR-200家族均可通过TGF．B1途径影响肿瘤的转移。而它们两者在调控肿瘤转移过程中是否存在关联在国内外罕有报道。本实验采用荧光实时定量PCR、MTT、ELISA等方法探

6、讨血小板蛋白酶活化受体．1以PARl激动剂(讯．I『R-NH2)激活后对SW620细胞miR-200b表达水平的影响，旨在为结直肠痛治疗提供新的依据。方法：1以不同浓度(1uM、3uM、5LlM、7uM、9uM、30aM)的PARl激动剂(讯．I瓜凇)处理SW620，同时设定空白对照组(单纯加细胞培养液)，在温箱中孵育24h后，采用MTT法枪测各组细胞，比较各中文摘要厶日翻可昂白{I萌霸}下h台匕6h爿畏，pjl且；m再啦■iZ巨哆a霸匕稿=JX‘rLo2应用ELISA法对不同浓度(1pM、3pM、5pM、7pM、9pM)PARl激动痢(TFLLR-NH2)激活的血

7、小板上清的TGF．pl迸行定量分析。3以3州浓度的PARl激动剂(TFLLR-NH2)激活人血小板后，提取血小板上清，设定4个处理组，分别取不同体积量(60p1、120lal、240ttl、480u1)的血小板上清处理6孔板中的SW620细胞，同时设定空白对照组及单纯激动剂组，空白对照组单纯加细胞培养液，单纯激动剂组加入0．72ttMPARl激动剂。存渝箱中分别孵育24h及48h后，利用TRIZOL法提取总RNA，反转录合成eDNA，采用基于2(．AACt)的实时荧光定量RT-PCR法对各组miR-200b的表达水平进行定量分析。结果：1MTT结果显示，小剂量各