胃腺癌组织差异表达蛋白质的分离与鉴定

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1、分类号：R735.2学校代码：10392学科专业代码：100214学号：201003137福建医科大学硕士研究生毕业论文胃腺癌组织差异表达蛋白质的分离与鉴定Separationandidentificationofdifferentiallyexpressedproteinsofgastricadenocarcinomastissue所在学院：第一临床医学院研究生：王锦洲学科、专业：肿瘤学导师：叶建新教授研究起止日期：2012年2月至2013年5月答辩日期：2013年6月9日二○一三年五月12目录中文摘要…………………………..…………………………………………2

2、英文摘要…………………………..…………………………………………4正文第一部分胃腺癌组织双向电泳优化及差异表达蛋白质的分离材料和方法…………………..…………………………………..6结果…………………..…………………………………………..13讨论…………………..…………………………………………..26小结…………………..…………………………………………..28第二部分胃腺癌组织差异表达蛋白质的质谱鉴定与分析材料和方法…………………..…………………………………..29结果…………………..…………………………………………..31讨论…………………..………

3、…………………………………..38小结…………………..…………………………………………..41第三部分胃腺癌组织黄曲霉毒素醛还原酶3（AKR7A3）表达降低的验证材料和方法…………………..…………………………………..43结果…………………..…………………………………………..44讨论…………………..…………………………………………..45小结…………………..…………………………………………..47结论……………..………………………………………………..48参考文献……………..…………………………………………..49致谢……………………………………

4、…………………………51论文综述胃癌蛋白组学的研究进展………………………………………..53参考文献……………………………………………......................5612胃腺癌组织差异表达蛋白质的分离与鉴定摘要近年来，高通量的基因组学技术使我们对肿瘤相关的基因有了深入的了解。但是，这并不足以使我们能够在分子水平对肿瘤发生的机制进行深入的剖析，基因组学技术无法对肿瘤蛋白水平、转录/转录后修饰以及蛋白—蛋白相互作用进行监测[1]。因此，有必要利用蛋白质组学技术对肿瘤相关的蛋白进行细致的研究。作为蛋白质组学的核心技术之一的双向凝胶电泳（2-DE）是19

5、75年由0’Farrell等[2]首先发明的，其基本原理是利用蛋白质的等电点和分子量的不同而将它们相互分离。利用2-DE对肿瘤与正常组织差异表达蛋白质进行分离和鉴定，有助于寻找肿瘤的特异分子标志物，可作为一种潜在的诊断工具。胃癌是一种常见的恶性肿瘤，其死亡率在所有恶性肿瘤中排第二位，世界上每年大约有75万人死于胃癌[3]。造成胃癌死亡率高的原因主要是其早期诊断率非常低，只有不到一半的患者能够在早期胃癌时被诊断。据AJCC的调查，IV期胃癌患者的5年生存率只有7%到10.1%，而早期胃癌（IA期）患者的5年生存率可达78%到93.3%[4,5]。因此，提高早期诊断

6、率对改善胃癌患者的预后十分关键。利用蛋白质组学的技术对临床的肿瘤标本进行研究，可以发现肿瘤相关的分子标志物。这类标志物既可以作为研发新的早期诊断方法的基础，也可以为了解肿瘤发生、发展的分子机制提供线索。胃腺癌是胃恶性肿瘤中最常见的病理类型，大约占其90%以上。我们希望通过对胃腺癌及正常胃组织双向电泳的技术进行优化，提高对碱性区域和低丰度蛋白的分离、检测，改善胃腺癌及正常胃组织蛋白质图谱的分辨率。在本研究的第一部分中，我们利用4个pH范围梯度重叠的IPG胶条对临床获取的胃腺癌及正常胃组织进行2-DE，分别获得了各自的总蛋白图谱。通过分析胃腺癌及其配对正常胃组织的2

7、DE图谱，共找出115个差异表达蛋白点。在研究的第二部分中，通过对着115个差异蛋白点分别经MALDI-TOF-MS质谱鉴定和数据库检索，共鉴定出70种差异表达的蛋白质。其中包括钙结合蛋白、波形蛋白、过氧化物歧化酶、α-烯醇酶、钙调理蛋白等27种在胃腺癌组织中高表达的蛋白质和43种3在胃腺癌组织中低表达的蛋白质如前胃亚蛋白酶、腺苷脱氨酶、二甲基精氨酸二甲胺水解酶、黄曲霉毒素B1醛还原酶、细胞色素C氧化酶亚基5B等。在第三部分的研究中，我们利用westernblotting的方法初步验证了AKR7A3在胃腺癌中表达下降。而AKR7A3的表达水平与胃腺癌的关系有待大

8、规模的免疫组化实验（组织