胃食管反流通过nfκb介导的炎症破坏小鼠食管粘膜屏障功能

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1、中图分类号UDC610博士学位论文学校代码!Q533密级公珏胃食管反流通过NFKB介导的炎症破坏小鼠食管粘膜屏障功能GastroesophagealRefluxAttenuatestheBarrierFunctionofMouseEsophagealEpitheliumthroughNFl(B．mediatedInflammation作者姓名：房渝学科专业：临床医学研究方向：外科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：胡建国教授论文答辩日期答辩委员会主席中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别

2、加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：丛年』月上日博士学位论文中

3、文摘要研究背景和目的：食管上皮屏障功能是食管粘膜对抗胃食管反流的重要防御机制。胃食管反流可诱导食管上皮屏障功能的损伤，食管粘膜对特定离子以及大分子通透性的增强以及上皮细胞间隙的增宽。因此，理解反流诱导的食管粘膜屏障功能损伤的机制对寻求胃食管反流病的有效干预措施具有重要的临床意义。Barrett食管是胃食管反流病的继发病变之一，但胃食管反流进展为Barrett食管的分子机制至今还不清楚。本研究的目的1)探讨NFr．B介导的炎症在胃食管反流诱导食管粘膜屏障功能损伤中的作用；2)探讨胃食管反流病进展为Barrett食管的分子机制。研究方法：建立手术诱导的胃反流，十二指肠反流和胃十二指肠混

4、合反流的小鼠模型．使用mini—Ussingchamber检测各反流食管粘膜跨上皮电阻抗值，利用电镜观察并比较各型反流食管粘膜上皮间隙的改变。应用基因芯片技术检测各型反流食管粘膜上皮内特异的基因表达谱，再利用生物信息学分析策略(例如GSEA和SAM)筛选出表达上调或者下调的转录因子，激活的经典信号传导通路以及具有相似功能的基因簇，同时也筛选出基因组内所有表达上调或者下调的基因。采用Real．timePCR，免疫印迹，ELISA和免疫组化方法检测筛选基因的表达水平。使用特殊组织化学染色来显示各型反流食管粘膜内炎症细胞的分布，并对炎症细胞的数量进行统计比较。分别给予十二指肠反流和混合反

5、流模型小鼠腹腔注射NFr．B抑制剂Bayl1．7085(20mg／kg／day)，观察食管粘膜跨上皮电阻抗以及炎症因子水平的改变。研究结果：与正常小鼠食管粘膜上皮比较，十二指肠反流和混合反流食管粘膜的跨上皮电阻抗明显下降，但胃反流粘膜并未有明显改变。电镜观察到十二指肠反流和混合反流食管粘膜上皮细胞间隙明显增本研究得到NIHU54CAl56735基金的资助TT博士学位论文中文摘要宽，而胃反流食管粘膜间隙并未明显改变。GSEA分析表明，在各型反流食管粘膜中有大量炎症相关基因簇和经典信号传导通路被激活，同时在十二指肠反流和混合反流食管粘膜上皮中可见NFr．B表达上调。通过将SAM数据与已

6、知NFrd3下游基因、紧密连接蛋白基因以及Barrett食管相关基因进行比对，筛选出一系列上调或者下调的NFr．B下游基因、紧密连接蛋白基因以及Barrett食管相关基因。Real—timePCR显示在十二指肠反流和混合反流食管粘膜上皮中紧密连接蛋白Cldnl，Cldn4，Cldnl0和Cldn23的表达均下调，同时Cldn7的表达上调。免疫印迹和免疫组化显示在十二指肠反流和混合反流食管粘膜中Cldnl和Cldn4蛋白表达水平明显下调并且在食管上皮内的分布发生了明显改变。免疫组化显示NFrd3亚基p50和p65，NFr．B下游基因MMP3和MMP9以及Cdx2在十二指肠反流和混合反

7、流食管粘膜上皮中的表达均明显上调。十二指肠反流和混合反流食管粘膜中炎症因子水平以及炎症细胞计数均明显增加。NFr,B抑制剂Bayl1-7085可以明显减弱反流对食管屏障功能的损害并且抑制反流诱导食管粘膜炎症因子水平的上调。研究结论：1)胃食管反流通过NFrd3介导的炎症损伤小鼠食管上皮屏障功能；2)胃食管反流通过激活Barrett相关基因的表达从而导致Barrett食管的发生。本文共有19幅图，5个表，85篇参考文献关键词：小鼠模型；胃食管反流；NFr,B；屏障功能；