四氮大环铜配合物和dna的相互作用

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1、维普资讯http://www.cqvip.com一第朗、Ol_【3．No4997年12月Dec．1997四氮大环铜配合物和0D6NA／自2勺／相互作点用02周井炎*李庆祥、／刘长林徐辉碧(华中理I大学化学糸，武汉430074)本文台成了四氮夫环铜配台物，以紫外和溴化乙锭荧光法研究了它和DNA的相互作用，t．g琼脂糖凝胶电泳就它作为化学棱酸酶的可能性进行了初步研究关键词：粤塾酲宣堑．紫外光谱溴lt己锭荧光法化学桉酸酶0前言在生理条件下借助于氧化或光活化显示出与天然核酸酶相同或类似生物活性的过渡金属配台物及其载体衍生物称为化学核酸酶]，有报

2、遭，四氮大环铜配台物为有抗艾滋病活性的化合物，我们参考有关文献台成大环配体，用它与铜离子反应形成终产物，台成了四氮大环锅配台物(下称大环铜配合物)通过紫外、荧光光谱研究了大环铜配台物和DNA的相互作用，并用琼脂糖凝胶电泳观察到了大环铜配台物的化学核酸酶性质，这将为大环铜配合物的药物应用提供有用的参考资料。1实验部分1．1仪器和试剂1．1．【仪器紫外可见分光光度计(日本岛津uV一240型)荧光分光光度计(日本岛津RF一540型)电泳仪(北京六一仪器厂)紫外反射透射分析仪(上海康华生化仪器制造厂)电子自旋共振仪(日本JEOL，dES—FE3

3、XG)1．1．2试剂·DNA溶液(0．38~lg／mL)、DNA—Ecorl溶液(0．5~tg／raL)华美公司产品，CTDNA，Sigma产品．其他均为国产分析纯试剂，实验用水为二次蒸馏水。收穑日期：l996】028。收修改稿日期：1990721画家自然科学基金资助课题·通讯联系人第作者周井篼，男，57岁，教授．研究方向：生物无机化学维普资讯http://www.cqvip.com第期四氰大环铜配合物和DNA的相互作用-39l·1．2实验方法1．2．1大环铜配合物的制备1．2．1．]制备大环配体5，7，7，】2，14，1d六甲基一【．

4、4，8．1l四氮杂环十四一4．】1二烯二碘化氢0．2mol乙二胺与10ml甲醇在冰浴混合后，缓慢加入0．2mol氢碘酸，再加入30ml丙酮，在冰浴中进一步冷却放置数小时或过夜，可析出白色晶体，抽滤并用少量丙酮洗涤数次．可得到配体。1．2．1．2制备大环铜配合物0．01mol配体与0．01mol乙酸铜在加热『!§、r]l回流状态下完全溶解在约40ml甲醇中，然后加入配体、继续加热搅拌1小时，趁热过滤后在承浴中加热浓缩至晶体开始形成，然后放在l八J冰浴中冷却1小时或更长时间，抽滤可得紫色的大环铜配合物．所得的配合物在无承乙醇中图l大环铜配台

5、物的结构Fig．1Structureofmacroeycli~coppercomplex重结晶(太环铜配合物的结构见图1)。1．2．2DNA溶液的配制紫外测定用DNA溶液用柠檬酸一氯化钠缓冲液配制(pH一7．O)，荧光测定用DNA溶液用HCI缓冲液配制(pH一8．0)，配制；~DNA溶液用磷酸缓冲液(pH一7．4)。1．2．3配合物的紫外和红外光谱以及ESR谱测定以水为溶剂测定大环铜配合物的紫外光谱，KBr压片测定大环铜配合物的红外光谱．在液氮温度下测定大环铜配台物的ESR谱。1．2．4大环铜配合物与DNA的相互作用1．2．4．1温度的

6、影响在升温和降温的条件下测定DNA溶液在260FilTh处的吸光度。1．2．4．2大环铜配合物的影响在DNA溶液中加入大环铜配台物，测ESR谱，在升温条件下测定DNA溶液在260Flm的吸光度．改变大环铜配合物的浓度，测定DNA在260Flm的吸光度。1．2．4．3溴化乙锭荧光强度测定在一定范围内观察大环铜配合物对溴化乙锭DNA荧光强度的影响(激发波长546nm．发射波长600FIrD)。1．2．4．4琼脂糖凝胶电泳1琼脂糖凝胶电泳，pH8．3的一HsBOs—EDTA缓冲溶液作为电极缓冲液，溴酚蓝作为电泳过程的指示标志，以；tDNA—E

7、corl为标准，设,a,DNAEcorl、；tDNA、3,DNA+大环铜配合物、DNA+大环铜配合物+巯基乙醇、DNA+大环铜配合物+HO、3,DNA+大环铜配合物+巯基乙醇+H：O各组研究大环铜配合物对DNA的切割作用。(EXDNA3=2．22X10mol,／L，LA环铜配合物]一6．67×10-。mol／L，[巯基乙醇]一[HO]一3．33X10tool／L)，电压155V，电泳8小时35分。电泳后，以溴化乙锭为显色剂，染色并在紫外透射反射分析仪中观察．以全色胶卷加红色滤光镜在暗箱中拍摄电泳图。由),DNAEcorl已知分子量的片断

8、估算断裂后主要产物的分子量。维普资讯http://www.cqvip.com·392·无机化学学报第13畚2结果与讨论2．I通常大环配体在220Dm有K吸收带，红外谱图在3200cm附撵近有NH伸缩振动吸收