温郁金中四个倍半萜类化合物的抗炎机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文答辩委员会主席答辩委员会成员论文答辩时间一一一～一温州医学院硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第一节MTT测细胞存活率⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯71．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．91．3实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第二节ELISA测定TNF．0【，IL．1p与IL

2、．6⋯⋯⋯．■⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．112．1材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112．2实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12第三节Griess试剂检测NO含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．153．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯153．2实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯16第四节活性氧试剂盒测ROS含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．174．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．174．2实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．17第五节ELISA测NF．v．B与DNA结合活性⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l95．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．195．2实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．20第六节免疫荧光染色检测NF．v．B核转运⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯216．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．226．2实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22第七节蛋白印迹测NF．vd3与Ivd3．0【⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯247．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯_⋯^⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．247．2实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26第八节结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯．28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3l附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．34综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43关于学位论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯432温州医学院硕士学位论文中文摘要温郁金中四个倍半萜类化合物的抗炎机制研究温郁金为姜科姜黄属(Curcuma)多年生草本植物温郁金Curcumawenyujin的干燥根茎，

5、广泛用于治疗由血液循环障碍所引起的炎症，如关节痛、痛经等。在前期工作中，实验室从温郁金中提取分离得到4个倍半萜类单体化合物，分别为(1)curcolide，(2)8,9-seco-4p-hydroxy-la，5pH-7(11)·guaen-8，10-olide，(3)7p，p0【·dihydroxy-ltx，4a11．guai．10(15)．en．5p，8p-endoxide，(4)zedoarondiol。本课题以LPS诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264．7)为模型研究这4个化合物的抗炎机制。噻唑蓝比色法(MTT)表明化合物1．4在0．01．100．OOp,M浓度范围内，对R

6、AW264．7无细胞毒作用。酶联免疫法(ELISA)结果表明这些化合物对脂多糖诱发的TNF．O【、IL．1D与IL．6水平升高具有抑制作用。Griess试剂检测法显示化合物1．4均能降低细胞内NO水平，活性氧(ROS)试剂盒检测法发现化合物1．4对细胞内ROS含量也有抑制作用。课题用ELISA检测化合物对NF．r．B与DNA结合活性的作用，结果表明化合物1．3能够不同程度地抑制NF．rd3与DNA结合活性，并且其抑制作用呈剂量依赖关系，而化合物4无此作用。免疫荧光染色观察到化合物1．3能够抑制NF．KB从细胞质到细胞核的转运，蛋白印迹实验(Westernblot)表明这3个化合物能够下调

7、细胞核内NF．KB水平，抑制胞内Ir．B．0【的磷酸化降解，其抑制作用呈剂量依赖关系。综上所述，化合物1．3能够减少促炎细胞因子的产生，抑制NF．rd3信号通路的激活，对LPS诱导的RAW264．7细胞产生抗炎作用。而化合物4通过下调促炎细胞因子产生抗炎作用，对NF．rJ3信号通路并无抑制作用。关键词：温郁金；抗炎机制；促炎细胞因子；NF．rd3信号转导通路3温州医学院硕士学位论文英文摘要Theanti··inflammatorym