肝癌个体化治疗的基础与临床研究

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1、学校代码：10023学号：200501002肝癌个体化治疗的基础与临床研究专业年级：北京协和医学院临床医学专业2005级姓名：赵雪学号：200501002导师：黄洁夫(教授)赵海涛(副教授)北京协和医学院临床学院(北京协和医院)肝脏外科完成日期：2013年6月目录Contents目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯i中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、66日盯亩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．第一部分microRNA在肝细胞肝癌复发中的表达研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9一、实验对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9二、试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9三、仪器器械⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10四、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16一、发表综述文章⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16二、肝癌复发相关的miRNA的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16三、新的肝癌恶性度相关的miRNA的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34第二部分肝细胞肝癌的3D培养技术与个体化治疗的初步研究⋯⋯⋯⋯．．35材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36一、实验对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36二、试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36三、仪器器械⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36四、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40一、肝癌细胞的迁移情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40二、肝癌细胞迁移能力受不同化疗药物的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．46参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49附录A．英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49附录B．附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．52说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54中文摘要研究背景肝细胞肝癌(肝癌)是一种高度恶性的肝脏肿瘤，影响患者预后的主要因素是术后复发。目前

6、microRNA的研究表明其在恶性肿瘤的发生发展中起到重要作用，参与了多条肿瘤相关的信号传导通路，而相关表达谱的研究也提示microRNA可以作为肿瘤诊断、预后评估的分子标记物。本研究拟通过用芯片研究microRNA在不同复发情况的肝癌患者肝癌组织中的差异表达，并研究下游靶基因的功能与参与的信号传导通路。研究肝癌恶性度相关的新microRNA在肝癌组织中的差异表达，探索新microRNA在肝癌发生中的作用机制，寻找肝癌早期复发的标记物。另一方面，肝癌异质性较高，肝癌患者对化疗药物的敏感性个体差异较大，而肝癌治疗尚缺乏统一而有效的术后辅助治疗

7、方案，个体化治疗可能提高肝癌患者术后治疗的疗效。目前关于肝癌个体化治疗的研究比较有限。本研究拟通过3D组织细胞培养技术，建立监测肝癌患者化疗药物个体敏感性的实验体系。目的发现肝癌复发相关的microRNA。发现肝癌预后评估的标记物。探索肝癌复发相关的发生机制。建立肝癌个体化治疗敏感性检测体系。方法研究一：收集肝癌早复发／晚复发患者的肝癌组织样本，运用芯片技术进行分析，寻找差异表达的microRNA，并用定量PCR验证。用差异表达的microRNA对肝癌样本进行聚类分析。用GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析对差异表达的microRNA

8、的下游靶基因进行研究，寻找与肝癌复发相关的异常细胞功能和信号传导通路。通过测序方法获得新的8条与肝癌恶性度相关的microRNA，用定量PCR方法在大样本肝癌患者的配对癌组织／癌