泰乐菌素单克隆抗体的制备及应用

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1、分类号：S墨苎窆：竖密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼学号：2QlQ垒鱼Q泰乐菌素单克隆抗体的制备及应用Preparationandapplicationofthemonoclonalantibodyfortylosin学位申请人：指导教师：合作指导教师：学科专业：学位类别：授予‘单位：答辩日期：张建康刘聚祥教授王建平副教授基础兽医学农学硕士河北农业大学二。一三年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰

2、写过的研究成果，也不包含为获得亟兰垦盔些盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：多煺康签字日期：加侈年占月；f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垒盔些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑皇垦盔些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适

3、用本授权书)学位论文作者签名：多次：建麋导师签名．幺叩像砑签字日期：易侈年岁月3／日签字日期：加侈年岁月罗7日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：本研究由；．--I北省科技支撑计划项目(编号11221001D)资助。摘要l吣帆2哪3帆8眦6咖咖5咖9岫6眦大环内酯类药物是兽医临床常用的一类抗生素，常用的品种有泰乐菌素(TYL)、替米考星(TMC)、乙酰异戊酰泰乐菌素(触YL)，主要用于治疗家畜和家禽的呼吸系统疾病。随着这些药物的广泛应用，它们在动物性食品中的残留逐渐受到重视。欧盟于1999年首先禁止泰乐菌素作

4、为饲料添加剂使用，之后各国也相继制定了一系列的残留控制体系。在大环内酯类抗生素的残留检测方法中，免疫分析法以其特异性高、简单、灵敏、快捷的特点而被广泛应用。本研究对泰乐菌素进行了分子改造，将其分别用6．氨基己酸和对氨基苯乙酸进行衍生化，合成两种新型半抗原(sTYL、PTYL)。然后，采用混合酸酐法将合成的半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接，制备两种免疫原和两种包被原(STYL-BSA、STYL．OVA、PTYL．BSA、PTYL．OVA)，半抗原与载体蛋白的结合比范围在13．16：1之间。以两种免疫原分别

5、免疫Balb／c小鼠，利用间接ELISA方法评价不同的包被抗原与抗体组合，经过多次试验，表明STYL．BSA具有较好的免疫特性。选择血清效价最高且对泰乐菌素有特异性的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞。以间接竞争ELiSA方法筛选阳性杂交瘤细胞，采用有限稀释法经过多次筛选得到两株阳性杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生法产生腹水，以饱和硫铵法进行纯化，得到单克隆抗体。所得抗体能同时识别泰乐菌素、乙酰异戊酰泰乐菌素、替米考星和泰乐菌素的代谢物脱藻糖泰洛星。以该抗体为基础，建立起一种检测4种大环内酯类抗生素的ELISA方法。该法对上

6、述药物的交叉反应率范围为46％．100％，ICso范围为15．8．34．0ng／mL，最低检测限(IClo)范围为1．6-2．0ng／mL。然后，将4种药物分别在空白牛奶中按照20．100ng／mL的浓度添加，ELISA方法检测，添加回收率范围为78％．96％，变异系数为4．2％．11．4％o．因此，本方法可以作为一种快速筛选工具用于动物源性食品中大环内酯类抗生素的多残留检测，以提高检测效率，保障动物性食品安全。关键词：大环内酯类药物；泰乐菌素；半抗原；单克隆抗体；ELISAPreparationandappHcationoft

7、hemonoclonalantibodyfortylosinCandidate：ZhangJiankangMajor：BasicVeterinaryMedicmeAdvisors：LiuJuxiangAbstractMaerolidesISaclassofantibioticsthatareusuallyusedasveterinarydrugs．Forexample,tylosin，tilmicosinandacetylisovaleryltylosionarethecommonlyusedrepresentativesfor

8、thetreatmentofvariousdiseasesinlivestockandpoultry．Asthesedrugsarewidelyused，meirresiduesinthefoodsofanimaloriginbecomeapublicconce