细胞因子对脓毒症大鼠l6细胞gilz表达的影响及其对mhc表达调控的初步研究

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1、分类号R6密级公开UDC610硕士学位论文细胞因子对脓毒症大鼠L6细胞GILZ表达的影响及其对MHC表达调控的初步研究学位申请人：屈万明学科专业：外科学指导教师：徐亮博士杨朝晖博士二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicinePrimaryinvestigationoftheinfluenceofcytokinestotheexpressionofGILZanditsregulationtotheexpressionofMHCinL6cell

2、sofsepticratsGraduateStudent:QuWanmingMajor:SurgerySupervisor:Dr.XuLiangYangChaohuiChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本

3、人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：初步探讨脓毒症大鼠L6细胞GILZ表达变化及其对M

4、HC表达的调控机制。方法：用含10%FBS高糖DMEM培养基培养L6肌细胞，用含有2%FBS的DMEM培养基进行分化，至细胞生长出肌管，用于实验；分别以大鼠脓毒症血清及正常大鼠血清处理细胞，PBS处理作为对照；以DEX作用于培养的L6肌细胞，再分别以不同的细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-10）和DEX同时作用于培养的L6肌细胞，在不同时间点（6h、24h、48h）分别提取总RNA和总蛋白，运用实时荧光定量PCR检测GILZ及GRmRNA表达水平；运用蛋白印迹（Western-blotting）检测GILZ、GR及MHC蛋白质表达水平。结果：荧光定量PCR结果显示：脓毒症血清组各

5、种加药方式不同作用时间处理下，GR表达水平升高（P＜0.01），GILZ表达水平升高（P＜0.01），且GILZ表达量与GR表达量具有显著正相关性（r=0.904，P﹤0.01）。脓毒症血清组及正常血清组不同加药方式处理24h，脓毒症血清组GR表达水平升高（P＜0.05），GILZ表达水平升高（P＜0.05）；正常血清组GR表达水平下降（P＜0.05），GILZ表达变化无显著差异（P＞0.05）；GILZ表达量与GR表达量具有显著正相关性（r=0.903，P﹤0.01）；Western-blott结果显示：脓毒症血清组各种加药方式不同作用时间处理下，GR表达水平升高（P＜0.01），G

6、ILZ表达水平升高（P＜0.01），MHC表达水平下降（P＜0.01）；各目的基因表达变化在24小时已具有显著差异（P＜0.01）；且GILZ表达量与GR表达量具有显著正相关性（r=0.934，P﹤0.01），GILZ表达量与MHC表达量具有显著负相关性（r=-0.817，P＜0.05）。脓毒症血清组及正常血清组不同加药方式处理24h，脓毒症血清组GR表达水平升高（P＜0.01），GILZ表达水平升高（P＜0.01），MHC表达水平下降（P＜0.05）；正常血清组GR表达呈下降趋势（P＞0.05），GILZ表达水平下降（P＜0.05），MHC表达水平升高（P＜0.05）；GILZ表达量

7、与GR表达量存在明显正相关性(r=0.960，P＜0.01)；GILZ表达与MHC表达量存在明显负相关性(r=-0.684，P＜0.05)；差异具有统计学意义。结论：体外模拟脓毒症模型，糖皮质激素处理骨骼肌细胞表现为GR持续性高表达，正常血清处理L6细胞则表现为GR抵抗；GILZ表达量与GR表达量具有明显的正相关性，GILZ表达量与MHC表达量具有明显的负相关性；GR、GILZ的高表达介导了骨骼肌蛋白降解，即MHC表达降低；细胞因子也参与了脓毒