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《补肾法防治原发性骨质疏松症的细胞_分子作用机理研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、··《中国老年保健医学》杂志年第卷第期论看补肾法防治原发性骨质疏松症的、细胞分子作用机理研究沈霖,随着人类寿命的延长和老年型社会的到来产品嗅化乙锭购自华美公司其它,。原发性骨质疏松症的发病率日趋上升其所导致均为市售分析纯、、、的身长短缩驼背畸形周身骨骼疼痛症状和全身二实验方法,,,症状使患者殊为所苦随之而来的骨脆性增高成骨细胞的分离和培养按本实验室法易,已经并将继续成为医疗和发骨折且难以愈合将新生大鼠同济医科大学实验动物中心提社会的重大问题。大量的临床实践证实,运用中供分离的颅骨成骨细胞种植在含小牛血清,,。医补肾法防治骨
2、质疏松症疗效显著但其疗效机的培养液中消化传代取二代培养的量尚有待深人研究。为此,本课题在卫生部科学成骨细胞用含小牛血清培养液配制成,,基金资助下以补肾中药补肾健骨胶囊为实验药的细胞悬液然后根据实验要求接种于,,物重点在骨细胞及分子水平观察了补肾法防治孔培养板中放人培养箱内孵育小时。,。骨质疏松的作用环节现将主要内容报告如下后培养细胞根据实验需要分组成骨细胞增殖测定培养的成骨细胞分为材料方法,,组分别加同体积药液对照组仅加培养液补、、、、一实验材料与试剂肾健骨胶囊组分别加人稀释为补肾健骨胶囊药液制备将补肾健骨胶囊拜不同浓度的
3、药液组分别加人、、。,药液同时各组再加人含药物浸膏配制成每含生药的药液调,,,,,值至加活性碳脱色次精滤分装灭小牛血清的培养液接种在孔培养板的细胞生,。,菌密封备用长小时后按比色分析法及一胸腺主要试剂重组碱性成纤维细胞生长因子嚓吮核昔一渗人法测定成骨细胞增殖。,情况为北京邦定公司产品。唾哇蓝、胶原酶型、、成骨细胞一阻表达的原位分鼠源性及一为产品购子杂交将第二代培养成骨细胞细胞密度、、,自中国原子能研究所培养基蛋白酶在无血清的一培养液培养小时随后在、、。各培养瓶中加人终浓度为生药量拌拜酶胎及胎牛血清为产品购、。拌拼的补肾健骨
4、胶囊药液及自上海化学试剂一厂一探针由日、,本国博士惠赠含鼠一重的继续培养小时后取出按实,级质料由留美学者朱闽博士惠赠采用德国验要求进行成骨细胞一日表达的原位分子杂交。公司地高辛标记及检测试剂盒进行标记,定量。杂交检测成骨细胞凋亡实验培养细胞被分为,,度试剂盒购自武汉博士生物工程有限公司。核酸组分别加同体积药液空白对照组仅加内切酶、均购自原平皓生物公司。液一组加人一诱导组分别加人剂量为、、的一补肾健骨胶囊鲜鱼精为公司产品蛋白酶为一组加人一的同时,再加作者单位华中科技大学同济医学院协和医院拌浓度的补肾健骨胶囊药液拌··论看《中
5、国老年保健医学》杂志年第卷第期。,,刺激天后再加入一观察小时胰酶消化去除骨髓基质细胞用冲洗玻片,,,,。后细胞经胰蛋白酶消化后调整细胞浓度为蛋白酶室温消化梯度乙醇脱水空气干燥,、,,加入含的荧光染液在每片滴加杂交液甲酞胺硫酸萄聚糖,,,,,下染分钟染过的细胞经过滤后应用断裂鲜鱼精子拜地高公,司生产的型流式辛标记一探针硅化盖玻片覆盖。,。。,细胞仪测定观察凋亡细胞的亚峰并测定湿盒中杂交去除盖玻片按公。,,,、所占细胞的百分数司试剂显色方法在室温黑暗中显色缓破骨细胞及骨髓基质细胞分离及培养按冲液中止反应,甘油明胶封片。每组选取
6、张盖,,。照本实验定法取出生乳鼠四肢长骨玻片每张玻片随机选取个细胞济太阳图像、,,。在新鲜牛股骨胫骨暴露骨髓腔培养骨髓基质处理系统测试杂交颗料着色平均光密度值。,,细胞后进行分组并添加重组人白细胞介本实验数据用均数标准差士表示显著。。素一及补肾健骨胶囊药液组为性检验用检验,空白对照组含培养的破骨细胞及共同培养的破一骨细胞和骨髓基质细胞各孔加入一、给果、、浓度为组为不同浓度的中药组、补肾健骨胶囊对体外培养成骨细胞增殖一,。每孔加人的同时分别加人和分化的影响结果见表补肾健骨胶囊药液、。浓度为。拌拜补肾健骨胶囊药液以剂量依赖方式
7、促,耐进成骨细胞的增殖与对照组。继续培养,拌,相比药液即可促进成骨细胞增殖并吸收陷窝计数及陷窝面积测量加药后培林,在浓度时达到最大效应,,养后每组选取骨片张计数每张骨片上形拜,当浓度大于时其作用趋于,成的吸收陷窝并用同济太阳彩色多饱和。便补肾健骨胶囊对成骨细胞增殖的促进作,。媒体图像处理系统计算每张骨片吸收陷窝面积用不及。一原位杂交破骨细胞或破骨细胞,,和基质细胞共同培养后连盖玻片一并取出表各组,、一测定结果士、组别药物浓度犯值一值对照组士士补肾健骨胶囊组拌士士拜士米土几拜士嵌曰口︹勺石马八﹄日︵士浓米拌嵌狱袱士士。涂⋯姚
8、炭组眼士士联米米狱寒士士士玫袱米桨米米士嫩,张米城亲鼓注与以照组比较尸尸补肾健骨胶囊对成骨细胞一倍和倍。差异显著和。组细胞,肛表达的影响结果见表加有补肾健一日虽高于拌拜拜,骨胶囊药液及组细胞及补肾健骨胶囊组但。一肛表达分别是阴性对照组的统计学无明显差异··《中国老年保健医学》杂志年第卷第期论著七一践的表
