一种适合于pcr扩增的真菌基因组dna提取方法_李晓倩

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1、山东农业大学学报(自然科学版)，2011，42(1):49－53JournalofShandongAgriculturalUniversity(NaturalScience)一种适合于PCR扩增的真菌基因组DNA提取方法李晓倩(泰山医学院生物科学系，山东泰安271016)摘要:以药用真菌灰树花和蛹虫草以及4种植物内生担子菌为材料，优化一种适用于PCR扩增的高质量基因组DNA提取方法。结果表明，采用改良SDS法提取药用真菌和植物内生担子菌基因组DNA的数量和质量都较为－1理想，A260/A280为1．8～1．9，DNA产量在110～170μg·g湿菌体。将提取

2、的DNA作为模板PCR扩增rDNAITS片段，扩增条带清晰，结果稳定、准确。该方法简便易行，成本低廉，适合富含蛋白质和多糖的真菌基因组DNA的提取。关键词:药用真菌，内生真菌，DNA提取，改良SDS法中图分类号:Q936文献标识码:A文章编号:1000－2324(2011)01－0049－05RAPIDEXTRACTIONOFFUNGALGENOMICDNAFORPCRAMPLIFICATIONLIXiao－qian(DepartmentofBiologicalSciences，TaishanMedicalCollege，Taian271016，China)

3、Abstract:AnefficientmethodforextractinghighqualitygenomeDNAfromtwomedicinalfungiandfourendo-phyticfungiwhichhadplentyofproteins，polysaccharidesandmanyotherchemicalsubstanceswasoptimizedforPCRamplification．TheresultsshowedthatqualityandquantityofgenomicDNAextractionfrommedicinalfung

4、iandendophyticfungiwithimprovedSDSmethodwereperfect．TheDNApuritywascheckedbyanalyzingthera-tioofA260/A280and110～170μg·g－1DNAwereobtainedfromeverygrammycelia(wetweight)ofdifferentstrains．TheywereusedasthetemplatesofPCRandtheamplifiedbandswereclear，stableandreliable．Thistechniquewass

5、imple，convenientandinexpensive，whichwasespeciallyadaptedtoextractionoffungalgenomicDNAwithabundantproteinsandpolysaccharides．Keywords:Medicinalfungi，endophyticfungi，DNAextraction，improvedSDSmethod［1－2］药用真菌和药用植物内生真菌作为重要的微生物资源，近年来在抗肿瘤、抗菌、抗病毒等方面发挥着越来越重要的作用，现已被广泛应用于生物医药、食品及生物防治等领域。真菌的鉴

6、定工作是真菌资源开发的关键环节。目前，真菌的鉴定仍以形态鉴定为主，但有一些药用真菌形态特征不易辨认或者不易产生子实体，有的药用植物内生真菌在人工培养基中不产孢，这给真菌的分类鉴定工作带来了很大的困难。随着分子生物学技术的不断发展，提取真菌的基因组DNA进行分子鉴定已成为真菌分类鉴定的一种重要方式。核糖体DNA上的内转录间隔区(internaltranscribedspacer，ITS)是存在于18SrDNA、5．8SrDNA和28SrDNA之间的区域，该区域受外界环境因素的影响较小，与编码区域相比具有进化速度快的特点，在种内的不同菌株之间高度保守，而在真菌种

7、间存在极大的变化，表现出极大的序列多态性，可以为真菌［3］［4］［5］学的研究提供丰富的遗传信息，已广泛用于药用真菌如冬虫夏草、金耳等的系统发育以及不产孢［6－7］植物内生真菌的分类鉴定等研究。优化简便易行的真菌高质量基因组DNA提取方法将会对真菌鉴定工作提供便利。高质量DNA要求收稿日期:2010－11－08作者简介:李晓倩(1982－)，女，助教，硕士，主要从事生物学及生物化学与分子分子生物学的教学研究。山东农业大学学报(自然科学版)第42卷高纯度、无蛋白、糖类、酚类、盐类等杂质污染，高分子量、无降解和有一定的数量。药用真菌和药用植物内生真菌的细胞壁都含

8、有复杂的多糖物质、色素以及成分不明的粘稠胞壁物质，这