旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原中血清学抗原的鉴定

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1、遵义医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢二正思。学位论文作者签名：夕蔓形次签字日期：加眵年厂月7广日遵义医学院学位论文版权使用授权书本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：遵义医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权遵义医学院可以将学位论文的全部或部分

2、内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学位论文，即：遵义医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位论文作者签名：乏撇导师签名：蚴签字日期：加哆年(月fr日签字日期：)口J岁年j_月，门目录l、论文：旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原中血清学抗原的鉴定英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯5日{J舌””“““⋯“”“”“⋯“”⋯”””““⋯“”．．““·5材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果······⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯······⋯···⋯⋯⋯⋯16讨论⋯000····⋯⋯⋯··O0QOQQ⋯⋯···⋯000⋯·······⋯⋯．．21结论········⋯········⋯······⋯·····⋯⋯···⋯⋯·····⋯⋯··⋯．．25参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262、综述：旋毛形线虫抗原研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯293、致谢⋯···········⋯·······⋯··

4、··⋯········⋯·····⋯······．·⋯⋯．．434、作者简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44遵义医学脘硕士研究生学位论文旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原中血清学抗原的鉴定缩略词ASABSADSSESELISAHEPCRPBSPAGERPMIl640SDSTspiralis嘶S英文缩略词表英文全称AmmoniamsulfateBovineserul'nalbumin中文全称硫酸铵牛血清白蛋白Disuccinimidylsuberat二酸二琥珀酰亚胺酯excretory-secretory代谢分泌enzyme-linkedimmu

5、nosorbentassay酶联免疫吸附试验hematoxylin-eosin苏木素一伊红染色PolymeraseChainReaction聚合酶链式反应PhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液Polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳RPMI1640mediumRPMI1640培养基SodiumDodecylSulfonate十二烷基磺酸钠trichinellaspiralis旋毛形线虫TrihydroxymeⅡlylaminomethane三羟甲基氨基甲烷遵义医学院硕士研究生学位论文旋毛形线

6、虫肌幼虫代谢分泌抗原中血清学抗原的鉴定中文摘要目的：采用免疫共沉淀偶联质谱技术分离和鉴定旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原，为筛选和鉴定旋毛形线虫病的有效诊断抗原及疫苗候选分子奠定基础。方法：1．旋毛形线虫感染新西兰兔，采用硫酸铵沉淀法分离血清IgG；从感染肌肉中分离纯化肌幼虫并培养收集代谢分泌抗原。2．免疫共沉淀和SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳分离代谢分泌抗原。3．质谱技术鉴定各蛋白质条带，利用肽片段质谱图分析鉴定血清学抗原。结果：1．间接酶联免疫吸附试验检测旋毛形线虫感染新西兰兔的血清抗体达1：6400以上；采用硫酸铵沉淀法使兔血清IgG得到有效的分离。2．

7、制备的代谢分泌抗原经电泳分离鉴定在约175kDa、83kDa、60kDa、32kDa处存在4条较清晰的蛋白质条带，提示旋毛形线虫肌幼虫培养24h后获得了代谢分泌抗原。3．免疫共沉淀的旋毛形线虫肌幼虫代谢分泌抗原经电泳分离获得5条较清晰的蛋白质条带，免疫印迹分析发现在40kDa至60kDa之间存在旋毛形线虫感染血清识别、正常兔血清不识别的2条较强的蛋白质条带。4．切取约40kDa和约55kDa处的蛋白质条带进行酶解和串联质谱分析，获得4种蛋白质分子，分别为丝氨酸蛋白酶、肌幼虫特异性丝氨酸蛋白酶、43kDa分泌糖蛋白、53kDa代谢分泌抗原。结论：1．旋毛

8、形线虫肌幼虫代谢分泌抗原经分离和鉴定获得4种蛋白质分子，分别为丝氨酸蛋白酶、肌幼虫特异性丝氨酸