广州管圆线虫v期幼虫特异性抗原的筛选及免疫鉴定

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：亡划萱国线虫y塑幼虫挂昱性拉厦的篮选区复疫鉴定答辩委员会主席：婆瞳越巫塞员答辩委员会成员：黄曦塾攫塞应蝰副巫塞虽论文答辩日期：至Q!垒生量且里垄目万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分广州管圆线虫感染所致心肺脑组织病理学变化材料与方法⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13第二部分广州管圆线虫V期幼虫特异性抗原2DWesternBlot及质谱分析材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第三部分广州管圆线虫V期幼虫特异性抗原的免疫鉴定材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯aliIBi⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34附录(一)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37附录(二)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39综述：广州管圆线虫功能蛋白研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50万方数据温州医科大学硕士学位论文广州管圆线虫V期幼虫特异性抗原的筛选及免疫鉴定中文摘要广州管圆线虫病(Angios

4、trongyliasiscantonensis)，亦称嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎或脑膜脑炎(eosinophilicmeningitisormeningoencephalitis，EM)，系由广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis)幼虫侵犯人的中枢神经系统而引起的一种人兽共患寄生虫病。它作为一种被忽视的寄生虫病，因其致病位置特殊，病人的脑脊液中查到虫体的检获率较低，故该病在流行病学、致病机理、实验诊断、药物治疗等方面均有待深入的了解。本研究首先通过石蜡切片技术，观察到感染AC大鼠肺、心、脑组织的病理变化，尤其在脑组织中发现坏死和钙化灶

5、；再通过双向电泳联合免疫印迹技术获得广州管圆线虫V期幼虫的特异性抗原，并进行质谱分析，得出半乳糖凝集素和肌动蛋白为该V期幼虫具有免疫原性的共同抗原。继而对获得的候选抗原半乳糖凝集素进行抗原表位预测，得出具有免疫原性的肽段序列，进一步进行WesternBlot验证了该肽段的抗原性。本实验为进一步深入研究“酸脑”发生发展机制、制定人工干预策略提供实验基础，可以为由广州管圆线虫引起的疾病的可能生物化学机制及药物研究提供靶标。目的1．利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对广州管圆线虫V期幼虫可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的蛋白质进行质谱分析和鉴定。2．获得广州管圆

6、线虫V期幼虫参与宿主免疫应答相关的蛋白质。3．获得广州管圆线虫病可能的调控靶标。方法1．石蜡切片；HE染色。2．虫体收集：收集v期幼虫，并用0．01mol／LPBS缓冲液洗3次。据其形态差异解剖镜下分离雌雄：雌虫，较细长，尾呈斜锥形；雄虫，可见典型且对称的交合伞，呈肾形。3．蛋白样品的制备：将收集的广州管圆线虫V期幼虫分别经裂解液裂解、超声裂解并离心，获得上清，用2．DCleanupKit处理获得的上清，得到蛋白样品。按照Bradford法进行蛋白质定量。分装后一80℃低温保存。4．双向凝胶电泳(2．DE)4．1第一向等电聚焦(IEF)4．2胶条的平衡4．3第

7、二向SDS—PAGE电泳：12％的SDS—PAGE凝胶。万方数据温州医科大学硕士学位论文5．免疫印迹：获得广州管圆线虫v期幼虫特异性抗原。6．质谱鉴定：胶内酶解，ZipTip脱盐，MALDI．TOF．MS鉴定、数据库检索。7．抗原表位预测：根据推导的蛋白质信息运用抗原表位预测工具进行抗原性的预测(http：HSVMTriP／prediction．phi,)。8．合成肽段免疫实验动物：获得该肽段特异性抗血清。9．免疫印迹：鉴定该肽段的抗原性。结果1．大鼠感染广州管圆线虫后的心肺组织石蜡切片中见多个虫体横断面、堂p及炎性渗出等；脑组织病理变化尤其严重，可见脑组织坏

8、死物填充及明显的钙化灶。2．广州管圆线