拟线粒体促凋亡多肽n7在人卵巢癌细胞对顺铂增敏作用的研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheresearchofproposedmitochondrialpro—apoptoticpeptidesN7inovariancancertocisplatinsensitivityPostgraduate：HongyanZhangSupervisor：ProfessorHongyuLiGynecologyandObstetricsTheThirdAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2013原

2、创性声明秉承郑州大学严谨的学风与优良的科学道德，本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用和致谢的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确的方式标明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人愿承担一切相关法律责任。学位论文作者：错{t戈日期：纠≥年6月J同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和

3、电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：妊It戈日期：砷f≥年汨f日摘要拟线粒体促凋亡多肽N7在人卵巢癌细胞对顺铂增敏作用的研究硕士研究生：张红岩导师：李红雨专业：妇产科学郑州大学第三临床学院河南郑州450052要卵巢癌的发生率在妇科恶性肿瘤居第三位，但它的死亡率却是第一。这由于卵巢位于盆腔深部，大多数

4、的患者发病时的早期症状不明显，故及时发现并给予有效的治疗很困难，约60％一70％的卵巢癌患者确诊时已经是临床晚期。目前晚期卵巢癌的治疗以肿瘤细胞减灭术，联合化疗为主的综合治疗。近年来，虽然紫杉醇和铂类药物的应用，使得卵巢癌的五年生存率有所提高，但由于卵巢癌细胞对铂类药物的耐药，晚期卵巢癌极易复发，使得其五年生存率仍然徘徊在20％．30％左右。现在卵巢癌是威胁女性健康的最主要的妇科肿瘤之一，因此寻找一种能够增加卵巢癌细胞对顺铂敏感性的方法成为现在研究的热点之一。研究显示，肿瘤的出现、进展不仅与细胞无限生长相关，还与细胞凋亡受到遏制相关联。细胞增殖与凋亡的平衡失

5、调，导致肿瘤的发生发展，因此诱导更多的肿瘤细胞凋亡，可能会延缓肿瘤的进展。细胞I内caspase．3的表达增多是顺铂诱发肿瘤细胞凋亡的方式。Samc基因是一种促进细胞凋亡的基因，在其指导下合成的Smac蛋白能发挥诱发细胞凋亡的功能，肿瘤细胞内它的高表达，借增多caspase．3的表达，诱使大量的肿瘤细胞凋亡，使恶性肿瘤的进展得到推迟。SmacN7蛋白是人工合成的拟Smac蛋白类似物，保持着Smac蛋白的天然生物活性。本研究用细胞免疫化学SP法、四甲基偶氮唑蓝法、平板克隆形成实验，探讨SmacN7蛋白能否增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性及可能的作用机制，从而临床

6、治疗晚期卵巢癌提供理论依据。摘要目的探讨拟线粒体促凋亡多肽N7(SmacN7)蛋白能否增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性以及与Caspase．3蛋白表达的的关系。方法1．研究对象：体外培养的对数期生长的人卵巢癌SKOV-3细胞。2．研究方法：以不同浓度的SmacN7蛋白联合顺铂及单独应用顺铂作用于体外培养的人卵巢癌SKOV-3细胞，细胞免疫化学SP法研究各组处理48h后SKOV-3细胞胞浆中Caspase．3蛋白的表达情况；24小时、48小时、72h小时后，四甲基偶氮唑蓝(M邢比色法研究细胞的增殖水平；平板克隆形成试验研究对该细胞克隆率的影响。3．统计学方法：S

7、PSSl7．0统计软件对数据进行单因素方差分析，计数资料的统计分析采用采用卡方检验，spearman法分析其相关性，计量资料数据均采用均数±标准差(孑-----S)表示，多组问比较采用方差分析。显著性水准a=0．05。结果1．SmacN7联合顺铂应用后，Caspase．3蛋白的表达比单独应用顺铂时明显增加(，=40．663rs=0．45P=0．000)。2．顺铂单独应用时，24h、48h、72h的细胞增殖抑制率分别为(6．15±1．12)％、(13．52_+1．15)％及(29．31±1．07)％。SmacN7联合顺铂应用时，5099／L、10099／L、2

8、0099／L，增加SmacN7浓度或者延长作用时间，