山西边城酒大曲中优势霉菌分离与形态鉴定

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1、山西边城酒大曲中优势霉菌分离与形态鉴摘要：本研究对山西边城酒大曲样本进行初步分离、纯化，获得2种霉菌：L1和L2o显微镜形态观察鉴定发现：L1菌株的菌落颜色为灰黑色、有细长皱褶、形状不规则、形态较大，L2菌株的菌落颜色为白色、菌丝呈放射状、形态较大，且L1和L2都可看到帚状的分枝和膨大的胞子囊;对2个菌株进行生理生化研究鉴定表明：利用氮源方面，两个菌株在含有酵母粉和牛肉膏的培养基中生长较好；利用碳源方面，2个菌株都能利用葡萄糖、半乳糖以及麦芽糖，但是都不利用蔗糖。通过对边城酒的优势霉菌的检测，为

2、边城酒生产过程中综合质量的提高提供理论依据；为酒曲生产工艺的改进提供理论基础。关键词：边城酒；霉菌；酒曲；分离和鉴定中图分类号：TS262.3文献标识码：A前言我国的酒类繁多，各具特色，并且我国酒文化的历史源远流长、酿酒技术历史悠久，早在夏朝时期就有历史记载。酿酒的关键在于酒曲，酒曲可分为：麦曲、大曲、小曲、红曲、魏曲［1-2］o对于边城酒的相关研究可以提高边城酒的生物营养价值，以及边城酒的综合质量［3］。1材料与方法1.1实验材料山西省大同市天镇县边城酒酒厂提供。1.2培养基的制备查氏基础培养

3、基：硝酸钠3,磷酸氢二钾lg、氯化钾0.5g、蔗糖30g、琼脂15g、水IL、pH4.7。在121°C下灭菌30mino提供碳源培养基：葡萄糖、麦芽糖、硝酸钠lg、磷酸氢二钾1.3g、磷酸氢二鞍0.5g.硫酸钠0.8g.水lLo在121°C下灭菌30mino提供氮源培养基：硫酸铁0.8,蛋白脓、酵母粉、硝酸钠lg、亚硝酸钠lg、水1L。在121°C下灭菌30minoPDA培养基：（去皮马铃薯、琼脂、水、葡萄糖）；取去皮处理干净的马铃薯200g,切成小块，加入水lOOOmL后煮沸30min左右，用

4、多层纱布过滤，取滤汁，再依次加入琼脂、糖分装于试管中。再在121°C下灭菌30mino麦芽汁琼脂培养基：（干大麦、水、琼脂）；取干净干大麦泡在水中培养获得较长麦芽，把干麦芽捣碎糖化后过滤，获得滤汁，再加入琼脂形成培养基。再在121"下灭菌30mino麦芽汁液体培养基：（干大麦、水）；取干净干大麦泡在水中培养获得较长麦芽，把干麦芽捣碎糖化后过滤，获得滤汁，然后在121工灭菌30min,再进行分装，即可形成培养1.3实验步骤1.3.1酒曲菌悬液的制备用电子天平准确称取3g由酒厂提供的酒曲样品，研磨捣

5、碎，放入有300mL的无菌蒸馅水的锥形瓶中摇匀5〜10min。再用5层纱布过滤，获得不含沉淀等杂质的清澈酒曲菌悬液。分别配制出浓度为：10%、1%、0.1%、0.01%、0.001%的无菌酒曲菌悬液。1.3.2涂布培养取5个无菌培养皿，都倒入温度冷却至5(TC左右的培养基15niL,取不同浓度梯度的无菌菌悬液0.lmL依次加入到培养皿中，用无菌涂布棒把菌悬液❷均匀，使得菌悬液在培养基上均匀分布。然后，把以上培养皿都放在37X2恒温培养箱中培养，观察菌落的形态和生长状况［4］。1.3.3菌种的分离

6、纯化等待培养基上长出目的菌后，在无菌操作台中进行以下实验：在PDA培养基上培养接种的菌落约24h,观察菌落的生长状况，重复上述无菌接种平板划线分离的方法直到在PDA培养基上生长出单一的菌落为止。一共获得2种纯化的单一菌株，并且把这两种纯化的菌株进行编号：LI、L2o再把这2种编号的菌株再接种到PDA培养基上，在37*恒温培养箱中进行培养。1.3.4菌落的显微观察在纯化的菌株生长24h后取出培养皿，用刀片切下小块长有菌落的培养基放在载玻片上，再放在显微镜下进行观察。并且把剩余的培养基继续放在恒温培

7、养箱中培养，定期取出，进行显微观察［5］。1.3.5霉菌的鉴定运用经典微生物分类的方法［6］对霉菌进行分类，根据霉菌的生态学、形态学和生理学等特征对霉菌进行形态以及生理生化方面的鉴定［7］。1.3.6LI、L2的生物特性1.3.6.1最适生长pH的测定准确配制pH为2、3、4、5、6、7、8、9的无菌麦芽汁液体养基，在无菌操作台中，把LkL2分别用无菌接种的方式接种到不同的pH培养基上，在37"的恒温培养箱中培养，观察菌株的生长状况［8］。1.3.6.2最适生长温度的测定在无菌操作台中，用无菌接

8、种的方式把LI、L2分别接种在相同情况的麦芽汁琼脂培养基上。把以上培养基再分别放在温度设为15°C、20°C、25°C、30°C、35°C、40°C、45°C、恒温培养箱中进行培养，观察菌株的生长状况［9］。1.3.6.3菌株对于碳源的利用把不含糖的查氏培养基作为基础培养基，依次在基础培养基中加入麦芽糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖等各种单一糖类。在无菌操作台中，把LI、L2分别接种到以上各个培养基上，然后把所以上所有培养基都放在37*的恒温培养箱中进行培养，观察菌株的生长状况。1.3.6.4菌株