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1、活性氧在热打击诱导神经元细胞凋亡中的作用DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.06.009基金项目：全军十二•五重点课题（BWS12J018）作者单位：510010广州，南方医科大学研究生院，广州军区广州总医院重症医学科（刘云松）；南方医科大学肿瘤研究所（邓旭斌）；广州军区广州总医院重症医学科（苏磊）通信作者：苏磊，Email：slei_icu@163.com【摘要】目的通过观察热打击诱导活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）爆发性增多对神经元细胞凋亡的影响，探讨重症中暑所致脑损害的发病机理
2、。方法建立神经元细胞热打击模型，对照组将细胞置于标准37°C.5%C02细胞培养箱，热打击组将细胞置于43£细胞培养箱中热打击2h,热打击后继续37°C.5%C02细胞培养箱孵育，DCFH法检测热打击后0h、0.5h、1h、2h细胞内ROS含量；AnnexinV-FITC/PI双染色方法和Westenblot检测热打击后Oh、3h、6h、12h细胞凋亡率及caspase~3蛋白表达，同时检测ROS特异性清除剂MnTMPyP对热打击后12h细胞凋亡的影响。结果与对照组比较，43°C热打击后0h细胞内ROS增加,2hROS呈爆发性增多（P〈0.05）；4
3、3°C热打击后3h神经元细胞开始出现凋亡，12h诱导大量凋亡（43.2%,P〈0.05）、caspase-3蛋白表达明显增加（P<0.05）,其趋势与细胞凋亡趋势一致；MnTMPyP明显抑制了43°C热打击后12h神经元细胞凋亡率（47.42%降至18.45%,P<0.05）及caspase-3蛋白的表达。结论R0S作为上游信号分子介导了热打击诱导的神经元细胞凋亡，但其介导神经元细胞凋亡的中间机制尚需进一步研究。【关键词】重症中暑；脑损害；热打击；热打击模型；神经元细胞；凋亡；凋亡机制；活性氧Theeffectofreactiveoxygenspec
4、iesonheatstress-inducedneuronalapoptosisLiuYunsong,DengXubing,SuLei.DepartmentofIntensiveCareUnit，GeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommand,KeyLaboratoryofTropicalZoneTraumaCareandTissueRepairofPLA,Guangzhou510010,ChinaCorrespondingauthor:SuLei,Email:slei_icu@163・com[Abstract]0
5、bjectiveToobservetheeffectofheatstress-inducedburstoutofreactiveoxygenonneuronalapoptosisandinvestigatepathogenesisofbraindamagecausedbysevereheatstroke・MethodsNeuronsheatstressmodelissetup.Controlgroupwereincubatedat37°C,5%C02,Whileheatstressgroupofcellswereincubatedat43°Cfor2
6、h,thenallthecellswerefurtherincubatedat37°Cfordifferenttimeasindicated.TheamountsofROSwereassayedbyDCFHstainingat0h,0.5h,1h,2hafterheatstress.ApoptosiswasanalyzedbyflowcytometryusingAnnexinV-FITC/PIstainingandexpressionofcaspase-3weredeterminedbywestenblotatOh、3h、6h、12hafterhea
7、tstress.Inaddition,MnTMPyPisthespecificscavengersofROS,whicheffectonapoptosisisalsostudiedat12hafterheatstress・ResuItsComparedwithcontrolgroup,amountsofROSwassignificantincreasedat0hafterheatstress,theburstoutofitwasat2hafterheatstress(P<0.05).Apoptosiswasinducedat3hafterheatst
8、ress,itwassignificantincreasedat12hafterheatstress(43・
