活性氧在血管紧张素ⅱ诱导ecv304细胞增殖中的作用

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1、活性氧在血管紧张素Ⅱ诱导ECV304细胞增殖中的作用作者：张旋，谢利霞，姚树明，张恒丽，褚薇薇，李莉，陈鹏，王殿华【摘要】目的探讨活性氧在血管紧张素Ⅱ诱导ECV304细胞增殖中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304)，实验分为AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组。采用改良MTT法、Fenton反应和硝酸酶还原法分别观察AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组的ECV304细胞的增殖率和细胞产生ROS(·OH)的量。结果一定浓度的AngⅡ(0.03125～1μmol/L)作用12h时ECV304细胞增殖率增加，明显高于正常对照组(P&l

2、t;0.05);AngⅡ可诱导ECV304细胞产生ROS(·OH)，ROS(·OH)的含量与ECV304细胞增殖率呈显著负相关；10mmol/LNAC可抑制1μmol/LAngⅡ对ECV304细胞的增殖作用，与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论AngⅡ可诱导ECV304细胞产生ROS(·OH)，ROS(·OH)含量与AngⅡ呈时间和剂量依赖性；NAC可抑制AngⅡ对ECV304细胞的增殖作用，这可能与减少ROS(·OH)的含量有关；ROS(·OH)可能是AngⅡ诱导的ECV304细胞增殖的主要信号转导分子之一。【关键词】N-乙酰半胱

3、氨酸血管紧张素Ⅱ活性氧ECV304细胞增殖【Abstract】ObjectiveToexploretheroleofreactiveoxygenspeciesintheproliferationofECV304inducedbyAngⅡ.MethodsThelinesofhumanumbilicalvEinendothelialcell(ECV304)culturedinvivoalculturemedium.FirstprovedMTTandmicroscope.ThenthecontentsofROS(·OH)inthreegroupseter.R

4、esultsECV304incubatedol/L)for12hoursincreasetheproliferationrate(P<0.05vscontrolgroup);Itissignificantthatthenegativecorrelationbetmol/L)caninhibittheproliferationofECV304inducedbyAngⅡ(P>0.05vscontrolgroup).ConclusionECV304inducedbyAngⅡcanproduceROS(·OH)，andthecontentsofRO

5、S(·OH)increaseeandtheenlargementofdose;AntioxidantNACcaninhibittheproliferationofECV304inducedbyAngⅡ，thiseffectmayberelatedaybeoneofthemajormoclecularsportantroleinthesignaltransductionofECV304proliferation.【Keya公司；特级无支原体新生牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所(批号20020114)；·OH测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所(批号

6、20030625)。1.2方法1.2.1实验分组(1)AngⅡ处理组：a.不同作用时间(4h、12h和24h)；b.不同浓度(AngⅡ终浓度分别为，0.03125μmol/L、0.0625μmol/L、0.125μmol/L、0.25μmol/L、0.5μmol/L和1μmol/L)；(2)NAC干预组：AngⅡ1μmol/L+NAC10mmol/L;(3)正常对照组：加入等量完全培养基。1.2.2ECV304细胞传代培养ECV304细胞在含20%小牛血清的RPMI1640完全培养基中，37℃、5%CO2、95%空气的培养箱中培养。台盼蓝染色后计算细胞

7、存活率(Via=99%)，调整细胞悬液浓度为1×106个细胞/ml备用。1.2.3改良MTT法测定ECV304细胞增殖率将备用的细胞悬液接种于96孔板，90μl/孔，每组设4个复孔。4h细胞完全贴壁后加入受试药物，10μl/孔(倍比稀释AngⅡ，使其终浓度为1μmol/L、0.5μmol/L、0.25μmol/L、0.125μmol/L、0.0625μmol/L和0.03125μmol/L)。置于培养箱中分别培养4h、12h和24h，之后每孔加入MTT液(5mg/ml)10μl，4h后分别在每孔加入三联液［10%十二烷基硫酸钠-5%异丁醇-0.012m

8、ol/L盐酸(单波长下测定每孔的OD值。细胞增殖率(%)=(实验组OD值-对照组OD值)/对照