干细胞转录因子sall4在胃部诊疗中的作用与机制

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1、分类号B235：2UDC鱼!鱼密级公珏一编号!Q22窆S!Q!垒Q33硕士学位论文干细胞转录因子SALL4在胃癌诊疗中的作用与机制THERoLEANDMECHANISMoFSTEMCELLTRANSCRIPTIoNALFACToRSALL4INHUMAMGASTRICCANCERDIAGOSISANDTHERAPY作者姓名：张玲指导教师：许文荣教授小组成员：钱晖教授朱伟研究员申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年5月3日论文答辩日期：2013年6月lO日学位授予单位：江苏

2、大学学位授予日期：2013年6月答辩委员会主席：张竹繁教授评阅人：基金资助：国家自然科学基金蓐大研究计划(91129718)l教育部博士点綦金(20113227110011)l江苏省自然科学摹金(BK2012709)l江苏省科技创新与成果转化专项(BL2012055)I江苏省博士研究生创新基金(CXLXl2—0678)独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果，

3、也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：张硷日期：加J弓年b月Ib日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将

4、本论文编入《中国’学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密,el。学位论文作者签名：狼诊汐l弓年眵月鸣E1指导教师签名≥_兰芦乡{《沁l>年幻、f幻江苏大学硕士学位论文摘要目的：检测干细胞转录因子SALL4在胃癌和癌旁组织、不同胃癌细胞株中的表达差异，探寻SALL4在胃癌发生发展中的意义，为胃癌分子诊断与靶向治疗提供新的思路。方法

5、：应用qRT．PCR和免疫组织化学，检测72例胃癌患者癌组织和对应癌旁组织中SALL4mRNA及蛋白的表达差异，分析SALL4表达与胃癌临床病理因素的相关性。qRT．PCR及免疫荧光比较胃癌细胞株中SALL4表达，transwell迁移实验比较高表达及低表达SALL4的胃癌细胞的迁移能力差异。用SALL4siRNAs抑制SGC．7901胃癌细胞中SALL4的表达，采用qRT—PCR和Westernblot验证抑制的效果，以平板克隆形成实验和transwell迁移实验评价胃癌细胞生长和迁移能力的变

6、化，用Westernblot及免疫荧光检测EMT相关蛋白的表达。通过G418筛选构建稳定过表达SALL4的HGC．27细胞株，以细胞计数、平板克隆形成实验和transwell迁移实验评价胃癌细胞生长和迁移能力的变化，通过Westernblot检测增殖、凋亡、EMT、干性相关蛋白的变化，成骨成脂诱导实验评价SALL4过表达对胃癌细胞诱导分化能力的影响，裸鼠皮下致瘤模型和腹腔转移模型研究SALL4对胃癌体内生长及转移的影响。结果：qRT．PCR结果显示胃癌组织SALL4相对表达量明显高于对应的癌旁组

7、织(氏O．0001)，且SALL4在胃癌组织中的表达与肿瘤的淋巴转移有关(P-=-0．0134)，而与年龄、性别、肿瘤大小、分化程干细胞转录冈子SALL4存胃癌诊疗中的作用与机制度和浸润深度无关。免疫组化结果发现SALL4基因特异性表达于胃癌细胞(胞浆与胞核)，而在癌旁组织或肠化生组织中未见其表达。高表达SALL4的AGS、SGC一7901胃癌细胞迁移能力显著强于低表达SALL4的HGC一27胃癌细胞。下调SGC一7901胃癌细胞中SALL4表达，显著减弱其迁移能力，细胞克隆形成数量减少，抑制E

8、MT发生，使E—cadherin表达升高，twist、N．cadherin、vimentin表达降低；相反，SALL4过表达在体外促进胃癌细胞生长和迁移；促进EMT的发生，使E．cadherin表达降低，twist、N—cadherin、vimentin表达升高；增强胃癌细胞干性，使胃癌细胞诱导分化潜能增强；体内促进胃癌皮下瘤的生长，腹腔转移模型中促进胃癌转移。结论：SALL4在胃癌的发生、进展中具有重要作用，可能通过诱导胃癌细胞发生EMT而促进胃癌的转移，并与胃癌细胞干性的获得有关。SALL4