转录因子creb在肾癌发生和转移中的作用及其分子机制研究

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1、R34公开分类号：____________密级：______________ＵＤＣ：____________单位代码：______________11646硕士学位论文论文题目：转录因子CREB在肾癌发生和转移中的作用及其分子机制研究学号：_________________________1211076002姓名：_________________________王雪生物化学与分子生物学专业名称：_________________________医学院学院：_________________________王萍指导教师：_____________________________________

2、_____________副教授论文提交日期：2015年04月13日AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeEffectsoftranscriptionfactorCREBonmediatingrenaltumorigenesisandmetastasisCandidate：XueWangSupervisors：(Associate)ProfessorPingWangFacultyofMedicineNingboUniversityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINADate04/13/2015独创性声

3、明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。签名：___________日期：____________关于论文使用授权的声明本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制

4、手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________转录因子CREB在肾癌发生和转移中的作用及其分子机制研究摘要肾细胞癌是泌尿系统的恶性肿瘤之一，发病率约占全部肾癌的70-75%。cAMP反应元件结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)，是细胞内重要的核转录因子。它与靶基因启动子区域的CRE(cAMPresponseelement)序列结合后，激活靶基因的转录活性，从而参与调控细胞周期、增殖和迁移等多种细胞功能。新近研究发现，CREB蛋白水平在部分癌组织和细胞中

5、呈显著性高表达。我们的前期研究也发现，阻断CREB与细胞增殖相关基因的结合能显著性抑制肿瘤细胞的生长，和抗癌药物诱导的肿瘤细胞凋亡。由此可见，CREB极有可能是机体内的一种原癌基因。然而，CREB在肾癌发生和转移的作用及其分子机制尚不清楚。本研究首先检测肾癌和癌旁组织、肾上皮细胞（HK-2）和肾癌细胞系（ACHN、786-O、OS-RC-2）中pCREB和totalCREB(tCREB)的表达情况；其次，构建定点突变133位丝氨酸的重组质粒和siRNA转染肾癌细胞系，降低细胞内pCREB水平；第三，体内外实验研究pCREB与肾癌细胞增殖的关系；第四，划痕和transwell实验探讨pCREB对

6、肾癌细胞迁移和侵袭的影响、以及免疫荧光实验检测丝状伪足在肾癌细胞迁移中的作用；最后，westernblot、生物信息学和chip实验分析pCREB介导肾癌转移的分子机制。结果发现，pCREB在肾癌组织及肾癌细胞系中的表达显著性高于癌旁组织和HK-2细胞；降低pCREB水平后，肾癌细胞的体外生长和裸鼠成瘤能力显著性被抑制；在降低肾癌细胞迁移和侵袭能力的同时，伴随着MMP-2和MMP-9蛋白表达的减少、以及丝状伪足的消失。进一步研究发现，pCREB通过调控EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Fibronectin）的表达影响肾癌转移。有趣的是，pCREB水平高低并不影响Vi

7、mentin的蛋白表达和纤维排列。生物信息学软件预测发现，Fibronectin启动子区域存在CRE序列，而Vimentin的启动子区仅含有CRE-BP结合位点；chip实验证实了pCREB能直接结合Fibronectin基因，而不调控Vimentin基因。由此可见，降低pCREB水平能抑制肾癌的发生和转移。其抑制转移的机制是通过改变细胞骨架微丝纤维的重排和调控上皮间质化相关蛋白的表达。然而，与间