转录因子creb对tnfaip1基因调控作用的研究

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1、硕士学位论文转录因子CREB对TNFAIP1基因调控作用的研究学科专业生物化学与分子生物学学位类别□√科学学位□专业学位研究生姓名肖慧导师姓名、职称向双林教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一五年五月分类号密级学校代码10542学号201202141227转录因子CREB对TNFAIP1基因调控作用的研究ResearchoftranscriptionfactorCREBinregulationofTNFAIP1gene研究生姓名肖慧指导教师姓名、职称向双林教授学科专业生物化学与分子生物学研究方向基因功能与调控湖南师范大学学位评定委

2、员会办公室二〇一五年五月湖南师范大学学位论文原创化声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的巧容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均＆在文中ＬＸ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承捏。＾学位论文作者签省：年月曰湖南师范大学学位论文版权使用授权书、本学位论文作者完全了解学校有关保留使用学位论文的规定，研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。

3、同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范大学可Ｌ乂将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｌ乂采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。户＂杉＾良：曰：作者签葦节痒期年—月訂导师签秦：曰期：年６月ｊＴ曰摘要TNFAIP1是一个被鉴定为受肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的蛋白，参与了DNA复制和损伤修复、细胞凋亡、调节细胞骨架结构及某些神经退行性疾病病变过程，如：阿尔兹海默症（AD）。CREB（cAMPresponseelement-bi

4、ndingprotein）是一个重要的核转录因子，介导了神经系统内多条信号转导通路，在神经元的生长、发育、凋亡，以及突触可塑性和学习记忆方面有重要调控作用。在本研究中，我们检测了化学药物Forskolin、Genistein、Valproicacid和Polydatin对人神经母细胞瘤细胞系（SKNSH）内TNFAIP1基因表达的影响，发现Forskolin可以显著降低TNFAIP1基因的mRNA水平和启动子活性。而Forskolin是一种腺苷酸环化酶激活剂（Cyclicadenosinemonophosphate，cAMP），能激活cAMP

5、-CREB信号通路，因此我们进一步探究了转录因子CREB与TNFAIP1基因的调控关系。KG-501是CREB蛋白的特异性抑制剂，实验证明，它能显著增强SKNSH细胞内TNFAIP1蛋白水平。因此，当过表达外源野生型CREB时，SKNSH细胞内TNFAIP1基因启动子活性和蛋白水平显著降低，说明转录因子CREB能负调控TNFAIP1基因的表达。但是过表达突变型的CREBs133a或KCREB却不能产生类似显著效果，说明CREB的ser133磷酸化和DNA结合域在转录因子CREB调控TNFAIP1基因表达的过程中有重要作用。我们进一步通过生物信

6、息学软件预测是否TNFAIP1基因近端启I动子区域内存在CREB结合位点，结果发现在-50和-196处有两个cAMP应答元件（CRE）。将这两个CREs元件进行缺失突变后，CREB对TNFAIP1基因启动子活性的抑制作用明显减弱。并且染色体免疫共沉淀实验（ChIP）也证实，CREB能结合在TNFAIP1基因近端启动子区域-290至-5以内，且包含CREs位点。说明CREB是通过结合在TNFAIP1基因近端启动子区域内的CRE元件上负调控TNFAIP1基因的表达，并且进一步实验表明，CREB蛋白ser133的磷酸化在Forskolin下调TNF

7、AIP1基因表达的过程中是不可缺少的。关键词：TNFAIP1基因，CREB，Forskolin，神经元IIABSTRACTTumornecrosisfactor,alpha-inducedprotein1（TNFAIP1）wasoriginallyidentifiedasatumornecrosisfactoralpha（TNF-α）-inducedproteinwhichinvolvesinDNAreplicationordamagerepair,cellapoptosis,controlcytoskeletonstructureandso

8、meNeurodegener-ativediseaseprogresssuchasAlzheimer’sdisease.CREB（cAMPresponseeleme