峨参提取物及其单体成分抗肿瘤活性及作用机理的研究

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1、国内图书分类号：脚!国际图书分类号：西南交通大学研究生学位论文密级：公开年级三雯二雯级姓名呈囱垡申请学位级别医堂亟±专业虫药堂指导教师呈超墓数援二0一三年五月Classifiedindex：U．D．C：足乡缸SouthwestJiaotongUniversityMasterDegreeThesisThestudyoftheanti-·tumoractivityandmechanismoftheAnthriscussylvestris(L．)Hoffm’extractsandmonomersClass：20lOCandidate：MAXiang—huaAcad

2、emicDegreeAppliedfor：MasterofMedicineSpeciality：ChineseMateriaMedicaSupervisor：Prof．MAChao-姐ngMay．2013西南交通大学曲南父逋大字学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南交通大学可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复印手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1．保密口，在年解密后适用本授权-

3、-I弓；弋／采保密口，使用本授权书。(请在以上方框内打“V”)学僦文储龋鳓啤指剥雠：吼z。／；t3-．z7日期：汐／弓．占、西南交通大学硕士学位论文主要工作(贡献)声明本人在学位论文《峨参提取物及其单体成分抗肿瘤活性及作用机理的研究》中所做的主要工作或贡献如下：l、本实验通过MTT法来检测不同浓度的峨参氯仿、石油醚、乙酸乙酯和峨参多糖提取物以及峨参内酯、异峨参内酯两个单体分别作用于HEPG2、MG．63、B16、HELA四个肿瘤细胞48h后的抗肿瘤活性，经过多次重复性实验表明：单体峨参内酯对于四种肿瘤细胞均有较强的抑制作用；异峨参内酯对MG．63和B16细胞

4、有显著的抑制作用；峨参石油醚、氯仿提取物对肝癌细胞HEPG2、宫颈癌细胞HELA的活性也较为显著，在药物浓度为100p,g／ml时，对肿瘤细胞的抑制率均在70％以上；而乙酸乙酯提取物仅对骨肉瘤细胞MG．63有一定的抑制作用，且抑制率不高，峨参多糖对于四种肿瘤细胞均无抑制作用。通过实验结果可知，峨参内酯对四种肿瘤细胞的抑制效果显著，有望开发成为抗肿瘤的新药。2、用倒置显微镜观察到，给予不同浓度的峨参内酯后，四种肿瘤细胞生长明显受到抑制，细胞体积缩小，连接消失，与周围的细胞脱离，细胞由梭形变成圆形细胞脱落，浮悬于培养液中，且随着剂量的增加，以上情形越明显；DAP

5、I染色后，荧光显微镜观察到，四种细胞的生长明显受到抑制，有明显的细胞核断裂和固缩，且随着药物浓度的增加，细胞凋亡现象更加明显，而对照组(0lag／m1)细胞完整，未见任何细胞凋亡迹象；DNAladder检测细胞凋亡实验中，用不同浓度峨参内酯处理细胞后，均产生细胞凋亡特征性DNA梯带，由此初步判断峨参内酯抗肿瘤的主要途径是通过诱导细胞凋亡来产生的。3、通过对昆明小鼠给予峨参内酯的急性毒性实验表明，峨参内酯虽然具有较高的抗肿瘤活性，但是其急性毒性也较强，用SPASSl7．0统计分析得到，峨参内酯的LDso为151．52mg／kg，其95％可信区间为93．28mg

6、／kg一252．94me,／kg。因此，我们将通过考察峨参内酯在肿瘤小鼠体内的抗肿瘤活性，考察其治疗量与毒性剂量之间的关系，从而探讨其安全性以及后期考察其长期毒性以及体内抗肿瘤实验可行性的关系。4、采用小鼠腹水型肝癌细胞株H22，建立肝癌小鼠动物模型，待造模成功后随机将小鼠分为7组，分别以峨参内酯高剂量组、中剂量组、低剂量组、峨参多糖组以及替加氟组作为治疗组，模型组及空白组采用0．5％CMC．Na作为对照。治疗结束后，观察小鼠的一般状态，胸腺指数、脾脏指数、药物的抑瘤率及不同药物组对小鼠的生命延长率，通过免疫组化技术初步检测给予不同剂量的肿瘤组织中bax、b

7、cl．2、P53的表达情况，探讨峨参抗肿瘤的分子机制。我们的初步研究表明，与模型组相比，峨参内酯能显著提高小鼠的生命延长率，峨参内酯能够上调bax的表达，降低bcl．2／bax比值，从而起到诱导肝癌细胞H22凋亡的作用，而各剂量组p53虽然均有一定的表达，但是各实验组之间无显著差异，由此推断p53基因的表达可能不是峨参内酯诱导细胞凋亡的主要途径。但是此推论尚需进一步深入实验研究探讨，本课题为以后的深入分子机制研究以及动物模型实验、临床试验提供了初步的实验依据。本人郑重声明：所呈交的学位论文，是在导师指导下独立进行研究工作所得的成果。除文中已经注明引用的内容外

8、，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研