杨树芽生物活性成分提取及其抗肿瘤作用的研究

《杨树芽生物活性成分提取及其抗肿瘤作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、肿瘤病冈学研究与中两医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集杨树芽生物活性成分提取及其抗肿瘤作用的研究郑光耀I，周维纯1，何玲2，宋强1(1．中国林业科学研究院林产化学工业研究所；国家林业局林产化学：r-,Ii重点开放·}生实验室，江苏南京210042；2．中国药科大学药理学教研室，江苏南京210009)摘要：目的：研究杨树芽提取物的体外抗肿瘤作用。方法：采用溶剂提取法制备杨树芽提取物，应用分光光度法、DPPH法和MTT法测定杨树芽提取物的黄酮含量、抗氧化活性和抗肿瘤作用。结果：杨树芽提取物黄酮含量高丁-蜂胶，但黄酮含量与抗氧化活性

2、高低不早正相关，杨树芽提取物对MCF-7、SMMC．7721、A5493种肿瘤细胞作用48h的抑制率分别达到97．1％、88．7％、60．5％。结论：杨树芽提取物对体外培养的肿瘤细胞生长有明显的抑制作用。关键词：杨树芽提取物：蜂胶；抗氧化活性；抗肿瘤活性杨树(PopulusL．)是我国重要的造林绿化、．1：业用材树种之一，主要分布于辽宁、华北、两北、华东等地区，资源极为丰富。每年12月至翌年2月，杨树幼芽会分泌大量的芳香类树脂。Greenaway等对蜜蜂采集的杨树芽分泌物的成分进行了分析，发现这些杨树芽的分泌物中含有数卣种酚类

3、化合物，同时这些化合物在蜂胶中也存在，表明杨树芽分泌物是蜂胶的胶源物质I-J。曹炜等对我国30个蜂胶样晶以及2个不同产地杨树芽提取物的成分进行了分析，发现它们都含有黄酮类、萜烯类、酚酸类及其酯类等生物活性物质12l。蜂胶的抗肿瘤作用己成为各国科学家和医学家研究的热点。Matsuno等报道蜂胶对人肝癌HuHl3细胞、人口腔癌KB细胞、人子宦颈癌Hela细胞等具有强烈的毒杀作HJl3】。Banskota等实验发现，巴两、秘鲁、荷兰和中国的9个蜂胶样品的甲醇及水提取物作朋丁鼠结肠癌26-L5细胞和人纤维肉瘤HT-1080细胞，均显示

4、细胞毒性作用141。Aso等研究表明，蜂胶提取物作用于人向血病U937细胞，能显著抑制U937细胞的生长及细胞中人分子化合物的合成，最终诱导U937细胞凋亡【5】。但有关杨树芽提取物抗肿瘤活性的研究报道还很少。本文采用不同溶剂提取方法制备杨树芽提取物，测定了杨树芽提取物的黄酮含量和抗氧化活性，在此基础上对杨树芽提取物进行了体外抗肿瘤作用的研究，并与市售蜂胶和杨树胶进行比较，为杨树芽提取物产品的开发提供理论依据。1材料与方法1．1药物与试剂杨树芽，2007年1月采自河南长葛地区，室内自然凉干后，用绞馅机将其绞碎成粉末，备用；蜂胶

5、，浙江省慈溪市新浦联合蜂场；杨树胶，河南省长葛市森蕾天然树胶加一l：厂；芦J‘标准品，北京药品生物制鼎鉴定所；RPMll640、DMEM，美国Gibco公司；DPPH、MTT、DMSO、小牛血清，美国Sigma公司；其余试剂均为市售分析纯。1．2肿瘤细胞株。。人肝癌SMMC．7721细胞株、人肺腺癌A549细胞株、人乳腺癌MCF-7细胞株，购自中国科学院上海细胞生物学研究所，常规方法传代培养。1．3杨树芽提取物的制备杨树芽中除含有黄酮类、萜烯类和酚酸类等活性成分外，还含有油脂类、以及水杨酸等物质。杨树芽粉末经笮i油醚抽提脱脂或

6、不脱脂、加水浸提去除水杨酸等水溶物或不除酸后，再用无水乙醇提取，分别得剑了脱脂除酸、脱脂朱除酸、朱脱脂除酸和未脱脂朱除酸4种杨树芽提取物，其提取：L艺如下：(1)脱脂：将杨树芽试样置丁索氏抽提器中，加入60～90℃石油醚，在80"C水浴锅中同流抽提10h后，取出脱脂的杨树芽粉末，干燥至水分小于8％，备用。(2)除酸：杨树芽试样用5倍的蒸馏水室温浸提12"-"24h，过滤，重复2次，去除含有水杨酸等水溶物的滤液，将除酸的杨树芽粉末干燥至水分小y-8％，备Hj。(3)提取：杨树芽试样用5倍的无水乙醇在50"C水浴同流2h，重复2次

7、，过滤，弃去滤渣，肿瘤病因学研究与中两医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集合并2次提取液，减压蒸发和真空干燥，得到浅棕色的膏状提取物。1．4黄酮含量的测定(分光光度法)精密称取无水芦J。对照品适量，加甲醇制成300ug／ml的溶液：吸取该溶液0、2、4、6、8、10西，分别置25ml容量瓶中，加入80％乙醇至12．5ml，加入5％ilp．硝酸钠溶液0．7ml，摇匀，静置5min，加入10％0硝酸铝溶液0．7ml，摇匀，放置6mira加入5％氢氧化钠溶液6ml，Hj80％乙醇定容至刻度，摇匀，放置10rain，以80％乙醇溶剂为空

8、自，在波长510nm处测定吸光度。绘制标准曲线见幽l。质量壤度，啦。ml，I图l标准曲线精确称取一定量试样，用80％乙醇溶液溶解，按标准曲线制备中的操作步骤，在波长510nto处测定吸光度，根据标准曲线算出样品中黄酮含量。1．5抗氧化活性的测定(DPPH法)精密称取O．125