山核桃外植体诱导培养及褐化机理的初步研究

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1、摘要本研究通过山核桃外植体筛选，基本培养基类型筛选，灭菌方法的筛选，抗褐化方法筛选，植物生长调节剂配比等方面进行山核桃外植体诱导的研究，并结合外植体生化指标以及细胞切片的观察，进行山核桃外植体诱导培养及褐化机理的初步研究，为加速山核桃品种选优和品种苗木的繁育提供一定的理论基础。本研究主要内容如下：（1）通过对3种不同外植体的筛选得出，带芽茎段为最佳外植体，它既能诱导出愈伤组织，其叶芽也能萌发，愈伤组织平均诱导率为86.43%；叶芽平均萌发率为45.29%。（2）通过对4种基本培养基的筛选得出，WPM培养基为山核桃诱导培养的最适培养基

2、。WPM培养基的平均褐化率相对较低，为40.35%，且叶芽诱导萌发率相对较高，为45.34%。（3）通过对8组灭菌试验得出，最佳的灭菌方法为1000倍多菌灵浸泡30min，蒸馏水冲洗干净，75%酒精浸泡60s，蒸馏水冲洗3次，0.1%升汞浸泡10min，蒸馏水冲洗3次。此种灭菌方法的平均污染率为26.21%，叶芽诱导萌发率为44.91%。（4）抗生素对外植体抗污染效果显示：向培养基中添加200mg/L青霉素钠的抗污染效果较好，平均污染率仅为7.80%。（5）通过Vc，Na2S2O3，AgNO3，PVP4种化学抗褐化剂的正交试验得出，

3、向培养基中加入Vc100mg/L+Na2S2O30.2mg/L+AgNO30.10mg/L+PVP0.1mg/L，能有效抑制外植体褐化，其褐化率为22.23%，叶芽萌发率为43.80%。（6）茶叶和番茄两种天然抗氧物的抗褐化试验显示，向培养基中添加3.0g/L的茶叶具有较好的抗褐化效果，其平均褐化率仅为31.59%，叶芽平均诱导萌发率为46.23%。（7）天然有机抗氧化物与化学抗氧化剂组合抗褐化试验结果显示，3.0g/L的茶叶配合0.10g/L的AgNO3抗褐化效果最好，平均褐化率仅为23.07%，叶芽萌发率为45.47%。（8）通

4、过培养初期的低温暗培养试验得出，前期10℃，2d的低温暗培养对于外植体褐化有一定的抑制效果，其平均褐化率为21.24%，叶芽平均萌发率为为46.07%。（9）通过对4种植物激素配比试验得出，2.4-D0.50mg/L+IBA0.20mg/L+6-BA0.05mg/L+KT1.00mg/L，为最佳激素配比，愈伤组织平均诱导率为94.38%，叶芽萌发率为46.46%。I（10）通过对带芽茎段体内4种生化指标的测定显示，褐化的带芽茎段体内PPO、POD、MDA、SOD活性变化幅度均明显大于未褐化的带芽茎段。PPO、POD、MDA均与与褐化

5、呈现正相关，SOD与褐化呈现负相关。（11）通过对带芽茎段的细胞切片观察显示，随着褐化程度的加深，细胞中积聚大量褐色物质，细胞膜逐渐破裂，失活，死亡；褐色物质的出现可能与PPO、POD活性的增加有关。关键词：山核桃，外植体，诱导培养，褐化，生化指标，细胞切片IIAbstractInthisstudy,researchingonthetissuecultureofCaryacathayensisSarg.bythefollowmethods,suchasselectivemedium,sterilizationmethodsandan

6、ti-browningprogram.AndcombinedwiththeexplantsbiochemicalmarkersandcellsliceobservationtostudyofthetissuecultureandbrowningmechanismofCaryacathayensisSarg.AndprovidedatheoreticalbasisforacceleratedCaryacathayensisSarg.breeding,improvedthevarietiesofseedlings.Theresultsa

7、reasfollows.(1)Intheselectionofthebestexplants,stemswithbudswasthebestexplants,itcangeneratecallusandthebudalsogermination,theaveragerateofcalluswas86.43%,theaveragerateofsproutingis45.29%.(2)TheoptiummediumwasWPM,TheaveragebrowningrateofWPMwas40.35%,andtheaveragegermi

8、nationratewas45.34%.(3)Thebestmethodofsterilizationwastosoaktheexplantsin1000timesofcarbendazimfor30mins,75%alcoholfo