天麻素对化疗诱导痛觉过敏的抑制作用

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1、分类号R96密级公开UDC硕士学位论文天麻素对化疗诱导痛觉过敏的抑制作用学位申请人：张金芝学科专业：药理学指导教师：郑卫红教授二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineTheInhibitoryEffectofGastrodinonChemotherapy-inducedHyperalgesiainRatsGraduateStudent:ZhangJinzhiMajor:PharmacologySupervisor:

2、Prof.ZhengWeihongChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013I三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，

3、在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：II三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：观察天麻素对长春新碱诱导痛觉过敏模型大鼠的预防及治疗作用，并研究其对大鼠脊髓背角星型胶质细胞和小胶质细胞活化以及TNFα、IL-1β等

4、炎性细胞因子表达的影响，探讨其在脊髓水平的作用机制。方法：(1)建立化疗诱导痛觉过敏模型的方法：挑选出痛阈合格的成年SD大鼠，随机分为2组，分别为生理盐水对照组和长春新碱模型组。模型组隔日一次腹腔注射长春新碱(125μg/kg)，对照组同步注射生理盐水(0.5ml/100g)，以首次给药当天为第一天(D1)，给药前测定一次痛阈值，给药后于第2天开始隔日做行为学实验，检测大鼠机械刺激和热刺激痛阈值。当模型组大鼠痛阈值明显降低时，即模型建立成功，记录给药总次数。(2)行为学方法观察天麻素对化疗诱导痛觉过敏的作用：取健康SD大鼠30只，随机区组法分为5组，分别为生理盐水

5、对照组，长春新碱模型组，小、中、大天麻素剂量组(30mg/kg，60mg/kg，120mg/kg)。首先，建立化疗诱导的痛觉过敏模型，即除对照组用生理盐水对照外，其它四组隔日腹腔注射VCR，共4次，模型建立成功后，于第9天药物治疗组开始腹腔注射天麻素，对照组和模型组用生理盐水同步对照，分别于治疗1-2周后，行为学方法检测记录大鼠的痛阈值变化。(3)免疫组化法测定大鼠星形胶质细胞活化的状况：分组及处理方法同(2)。于末次治疗第2天，用2%戊巴比妥钠(60mg/kg)麻醉大鼠，然后用4%多聚甲醛对大鼠行活体灌流，取大鼠脊髓腰膨大，固定、脱水、包埋处理，并做石蜡切片，采

6、用免疫组化SV法检测星形胶质细胞活化标志物GFAP的表达。(4)免疫荧光方法检测大鼠脊髓小胶质细胞的活化状况：分组及处理方法同(2)。大鼠取材方法同(3)，取出腰膨大后固定，蔗糖脱水，冰冻切片，免疫荧光技术检测小胶质细胞活化标志物物Iba-1的表达。(5)酶联免疫吸附法检测大鼠脊髓IL-1β和TNFα的表达变化：分组及处理同(2)。用天麻素治疗1周后，于末次治疗第2天，大鼠用20%乌拉坦(1ml/100g)深麻醉下断头处死。取出脊髓腰膨大处，加入预冷的生理盐水，用匀浆器按1:9(W/V)的比例制成10%的组织匀浆，于4℃离心机，3500r/min离心10min,提

7、取上清液于-20℃冻存待测。采用ELISA方法进行测定。(6)MTT法检测天麻素对长春新碱杀伤癌细胞的影响：将VCR按6.25、12.5、25、50、100、4200、400、800μg/ml浓度加入含有乳腺癌细胞(MCF-7)的培养孔中，细胞浓度2-4×10，培养24小时，用噻唑蓝(MTT)比色法测定OD值，计算细胞增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50)；将天麻素按0.39、0.78、1.56、3.13、6.25、12.5mg/ml浓度单独加入含有MCF-7的培养孔中，同时将VCR和天麻素联合用于MCF-7，培养24小时，MTT法测定OD值，计算生存率。III三峡

8、大学硕士学