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时间:2019-03-04
《地西他滨对多发性骨髓瘤细胞株u266增殖凋亡的影响及诱导p16基因去甲基化的实验研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应的法律责任。研究生躲璐新麟獭研究生学位论文独创性声明导签章:日本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,指导老师对此进
2、行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。研究生签名:瑶导师签章:礓⋯衫日目录『IMHllllllIIIIIIIIIIIIIIIY2336859中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.5研究论文地西他滨对多发性骨髓瘤细胞株U266增殖凋亡影响及诱导P16基因去甲基化的实验研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11日iJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.26讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.32综述多发性骨髓瘤的治疗进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯‘j个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.,⋯..44中文摘要地西他滨对多发性骨髓瘤细胞株U266增殖凋亡影响及诱导P16基因去甲基化的实验研究摘要目的:多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是一种的浆细胞克隆增殖性疾病。目前尚不能治愈,近些年MM的靶向药物的研究取得了新的进展,去甲基化药物地西他滨(decitabine,DAC)为其中一种。国内外研究均已证实一些MM细胞系中存在异常的高度甲基化,经常发生于富于CpG岛的肿瘤抑制基因(如P15INK4B基因,
5、P16基因,P53基因)启动子区,并导致基因的沉默。DAC是一种核苷类似物,能够在DNA复制过程中掺入DNA,代替肿瘤内的胞嘧啶与DNA甲基化转移酶共价结合,通过与DNMT半胱氨酸残基上的巯基共价结合从而使酶失活。FDA已经正式批准DAC用于治疗骨髓增生异常综合征(MDS)。基础研究表明P16基因的缺失和突变在人类恶性肿瘤中普遍存在,并有报道在检测各种恶性肿瘤细胞系中P16的突变率达300/0~80%,P16基因甲基化在多发性骨髓瘤中较为常见。为进一步明确DAC对多发性骨髓瘤细胞增殖抑制及促凋亡的机制,本实验选用多发性骨髓瘤细胞株U266,观察
6、DAC对U266细胞增殖的抑制以及诱导凋亡作用,检测甲基化酶D1心仃3AmRNA,P16基因mRNA表达的变化及DAC作用后P16基因甲基化状态改变的情况。为多发性骨髓瘤新的治疗方法提供理论依据。方法:1常规方法培养人多发性骨髓瘤细胞株U266,每48—72小时传代一次。选用对数期细胞进行试验。每组实验重复3次。2CCK-8法检测不同浓度的DAC单药对多发性骨髓瘤细胞U266增殖的影响:DAC的终浓度分别为O.2、O.5、1.2mmol/L,单药组分别作用24h、48h、.72h观察U266细胞的抑制率。计算公式为:细胞增殖抑制率(%)=(1.
7、实验组OD鲥照组OD值)x100%。3AnnexinV/PI双染法检测不同浓度的DAC对U266细胞凋亡的影响,药物作用浓度同方法2,观察单药作用24h、48h、72h的凋亡率。4流式细胞仪检测不同浓度DAC作用72小时后细胞周期分布变化。70%中文摘要乙醇透膜处理细胞。后加入RNase孵育,加入PI(Propidittrnidodide染色剂、)染液室温避光染色30min。药物浓度同方法2。5实时荧光定量PCR法(real。timeQ.PCR)检测P16基因mRNA,D№仃3AmRNA的表达情况。收集终浓度为O.2、O.5、1.2mmol/L
8、的DAC分别作用48h后的细胞,提取总RNA,逆转录合成eDNA后,real-time.PCR法检澳lJPl6基因mRNA,Ⅸ呱仃3AmRNA的表达。
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