丙戊酸对手工克隆猪胚胎发育潜能影响的初步研究

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1、分类号UDC硕士学位论文丙戊酸对手工克隆猪胚胎发育潜能影响的初步研究吕玲燕学科专业动物遣佳直弛墨繁殖指导教师互徨题巫究旦塞丛麽友硒究旦论文答辩日期2Q!兰生鱼旦三旦学位授予日期答辩委员会主席虐鱼生受广西大学学位论文原创性和使用授权声明掣煳本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产

2、权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。砾保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名：吕珍燕指导教师签名：王^京骚作者联系电话：f7f夕rf9加∽日期：洳哆．6．圆日期：沙I,t，6．占电子邮箱：f曙伉，1侈尹矽．形夕·C。h丙戊酸对手工克隆猪胚胎发育潜能影响的初步研究摘要手工克隆(HandmadeCloning，I

3、-IMC)技术是近年来出现的新技术，被国际克隆和胚胎学领域誉为“具有划时代意义的突破性技术进展’’。本研究优化了本实验室HMC猪胚胎的技术体系，并探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸(valproicacid，WA)对手工克隆猪胚胎发育潜能的影响。取得如下研究结果：1．本实验室HMC猪胚胎技术体系的优化。(1)探讨了用0．4舭脱羰秋水仙碱(decarburizationcolchicine，DC)处理结合3．3mg／mL链酶蛋白酶消化后恢复对去核效率的影响，其中用DC处理成熟卵母细胞60min，链酶蛋白酶消化后恢复25min，得到最高的整体去核效率76．19％，链酶蛋白酶消化后恢复2

4、5min得到的整体去核效率高于消化后恢复15min得到的整体去核效率。(2)探讨了粘合方式对融合效率的影响，去核后半卵的粘合采用卵一卵一供体、卵．供体．卵两种方式，其中以卵一供体．卵式的粘合方法得到的融合效率最高(87．17％VS74．40％)。通过体系的优化，HMC猪的囊胚率显著高于优化前的囊胚率(36．69％VS21．15％)。2．探讨了VPA处理来自不同类型供体细胞的HMC猪胚胎对其发育效果的影响。当用颗粒细胞(granularcell，GC)为核移植供体时，用50nmol／L的VPA处理HMC猪重构胚24h的囊胚发育率(48．92％±1．76)极显著高于对照组(36．87％

5、4-0．74)，25nmol／LVPA(32．58％±0．96)，75nmol／L(37．91％±1．24)和100nmol／L(32．27％±0．67)的重构胚(尸

6、95％±2．29)的囊胚发育率(尸

7、C猪重构胚组蛋白acH3K14水平的影响。试验结果表明：(1)一抗acH3K14的最佳免疫荧光染色浓度为1：100，二抗acH3K14的最佳免疫荧光染色浓度为1：200。(2)50nmol／LVPA处理24h组(HMC．V)2-cell及囊胚阶段的组蛋白acH3K14水平(1．044±0．023，1．117±0．020)极显著高于空白组胚胎(蹦C)2-cell及囊胚阶段的组蛋白acH3K14水平(O．913±O．026，1．079-t-0．017)(P