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1、谷氨酰转肽酶细胞合成L-谷氨酰正丙胺徐礼生收稿日期:基金项目:安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2017A440);安徽省质量工程项目(2015zjjh034、2015ckjh108、2016jyxm1038)作者简介:徐礼生(1980-),男,安徽安庆人,理学博士,副教授,E-mail:xulisheng111@163.com。1,2,王梦婷1,高贵珍1,赵亮1,曹稳根1,焦庆才2(1.宿州学院生物与食品工程学院,安徽宿州234000;2.南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏南京210093)摘要:以L-谷氨酰肼和正丙胺为底物,利用谷氨酰转肽酶细胞合成L-谷氨酰正丙胺,考察底物浓度
2、、温度、pH、催化剂用量对合成L-谷氨酰正丙胺的影响。结果表明,谷氨酰转肽酶细胞能有效合成L-谷氨酰正丙胺,在温度37℃、pH=10.0、L-谷氨酰肼浓度为0.4mol/L,正丙胺浓度为3mol/L的条件下,谷氨酰转肽酶细胞催化剂添加量为0.2g,300mL反应体系L-谷氨酰正丙胺的收率为97.9%,经高效液相色谱法测定,L-谷氨酰正丙胺纯度为99.8%。关键词:谷氨酰转肽酶;L-谷氨酰正丙胺;L-谷氨酰肼;生物工程SynthesisofPropyl-L-GlutaminebyGlutamyltranspeptidaseCellXULi-sheng1,2,WANGMeng-ting1,GA
3、OGui-zhen1,ZHAOLiang1,CaoWen-gen,JIAOQing-cai2(1.DepartmentofLifeandFoodScience,SuzhouUniversity,Suzhou234000,Anhui,China;2.StateKeyLaboratoryofPharmaceuticalBiotechnology,NanjingUniversity,Nanjing210093,Jiangsu,China)Abstract:Synthesisofpropyl-L-glutaminebyglutamyltranspeptidasecellswasinvestigat
4、ed.WithL-glutamlhydrineandpropylamineassubstrate,thefactorssuchassubstrateconcentration,pHandtemperaturewereinvestigated.Synthesisofpropyl-L-glutaminebyglutamyltranspeptidasecellswaseffective.TheresultsindicatedthatwhentheconcentrationofL-glutamlhydrinewas0.4mol/L,theconcentrationofpropylaminewas3
5、mol/L,glutamyltranspeptidasecellscatalyst dosagewas0.2g,reactiontemperaturewas37ºC,andpHwas10.0.Theyieldofpropyl-L-glutaminewas97.9%in300mlreactionvolume.Thepurityofpropyl-L-glutaminewas99.8%byhighperformanceliquidchromatography.11Keywords:glutamyltranspeptidase;propyl-L-glutamine;L-glutamlhydrine
6、Foundationitems:TheKeyProjectofNaturalScienceResearchinUniversitiesinAnhuiProvince(KJ2017A440);AnhuiQualityEngineerProgram(2015zjjh034,2015ckjh108,2016jyxm1038)谷氨酰转肽酶作为一种重要的酶参与谷氨酰循环反应,它能特异性地催化谷氨酰基团的迁移过程,从而获得含有谷氨酰基团化合物[1,2]。谷氨酰转肽酶来源广泛,稳定特性较好[3]。动物脏器和变形杆菌可纯化得到γ-谷氨酰转肽酶,它对谷胱甘肽有转肽以及水解作用[4-5]。γ-谷氨酰转肽酶在临
7、床检查中可作为生物标识物[6]。L-谷氨酰基类化合物具有重要生物活性,医学上该类物质应用广泛,利用谷氨酰转肽酶可制备L-谷氨酰基类化合物,如谷胱甘肽、茶氨酸、谷氨酰甲胺等谷氨酰基类物质[7]。ChenYY等人利用Bacilluslicheniformis中γ-谷氨酰转肽酶催化合成γ-L-谷酰基-S-丙烯基-L-半胱氨酸,并且对来源于Bacilluslicheniformis中γ-谷氨酰转肽酶结构、功能和稳定性进行了研究[