资源描述：
《γ谷氨酰转肽酶酶学性质的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、γ-谷氨酰转肽酶酶学性质的研究作者：蒋敏丽,孟佩佩,高鹏,胡立勇【摘要】目的了解地衣芽孢杆菌菌体细胞中γ-谷氨酰转肽酶的一些基础酶学性质。方法采用溶菌酶法破碎细胞壁，经硫酸铵沉淀后透析得到粗酶后，采用紫外分光光度法测定该酶的酶活力。结果该酶在25~35℃的温度范围有很好的耐受性，在碱性条件下保持一定的活性，最适反应温度为45℃，最适反应pH值为8.0，Ca2+、Mg2+等金属离子在适当浓度时对酶活性有促进作用。结论本实验为利用该酶转化生产茶氨酸提供了依据。【关键词】γ-谷氨酰转肽酶;酶学性质;茶氨酸 Abstract:ObjectiveTounderstandsomebasicpro
2、pertiesofγ-glutamyltranspeptidasefromBacilluslicheniformis.MethodsLysozymewereusedtodisruptthecellwallandammoniumsulfatewereusedtoseparateprecipitationanddialysis,atlastthecrudeenzymewereobtained.UVspectrophotometrywereusedtomeasuredtheenzymeactivity.ResultsThisenzymewaswelltoleranttotemperatur
3、eintherangeof25~35℃,butinalkalineconditions,itmaintainedacertainactivity,theoptimumreactiontemperaturewas45℃andoptimumreactionpH108.0,generallytheappropriateconcentrationofmetalions,suchasCa2+,Mg2+,hadapositiveeffectontheactivity.ConclusionThisexperimentcouldbeusedinproductionoftheaninewithγ-gl
4、utamyltranspeptidase. Keywords: γ-glutamyltranspeptidase;enzymologicalproperty;L-theanine γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GTP,EC2.3.2.2),又称γ-谷氨酰转移酶,在生物体内广泛存在,是谷胱甘肽(GSH)代谢的关键酶之一。该酶还参与了氨基酸的跨膜转运,可特异性催化γ-谷氨酰基的转移反应[1]。人们对γ-GTP的早期研究局限于该酶在GSH代谢中所起的作用[2]。随着研究的深入,人们对γ-GTP的催化功能和分子结构有了更多的了解,并发现其在临床上
5、可作为肝胆疾病的生物标志,被广泛应用于肝病及其他脏器疾病的诊断和预后检测[3-4]。近年来,由于生物技术发展突飞猛进,生物催化与生物转化技术在工业生产中逐渐兴起,利用γ-GTP制备系列γ-谷氨酰基类化合物的研究已成为生物催化领域的热点。已有报道利用γ-谷氨酰基化(γ-glutamylization)反应合成了GG-DOPA等多种化合物[5-7]。目前，利用来源于枯草芽孢杆菌、基因工程改造的大肠埃希菌的γ-GTP生产茶氨酸[8](L-theanine,γ-L-glu-ethylamide)越来越受到人们的关注。该方法利用γ-GTP将L-谷氨酰胺上的γ10-谷氨酰基转移到乙胺受体上,催化
6、合成L-茶氨酸。但利用地衣芽孢杆菌发酵所产的γ-GTP转化合成茶氨酸尚未见报道。本文利用实验室筛选的γ-GTP高产菌株地衣芽孢杆菌发酵产酶，并研究该菌株所产的γ-GTP的基础酶学性质，为进一步利用地衣芽孢杆菌所产的γ-GTP生产茶氨酸提供依据。 1材料与方法 1.1主要材料与试剂 菌种：地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)由本实验室筛选获得。试剂：Tris购自北京普博欣生物公司;L-γ-谷氨酰对硝基苯胺、双甘肽均购自广州威佳科技有限公司;硫酸铵为国产分析纯。 1.2地衣芽孢杆菌的产酶发酵 用接种环在活化好的菌种斜面上刮下一环菌种，将其转入到种子培养基，
7、30℃、240r/min摇床振荡培养16h。以20%接种量转接于发酵培养基(30mL发酵液/300mL三角瓶)中，在30℃下240r/min摇床培养28h后收集菌体。 1.3γ-GTP粗酶的制备10 γ-GTP发酵瓶培养液离心(4800r/min,10min)，弃上清液，用TE缓冲液(Tri-HCl缓冲液,pH8.0，10mol/L)重悬菌体,采用溶菌酶法以及硫酸铵盐析法制备粗酶液。 1.4酶对温度的耐受性 以TEpH8.0为缓冲液，不同温度下保存
