rac1调控香烟诱导肺上皮细胞—间质细胞转变

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1、B垒￡兰调控叠龃透昱膻土庭纽胞：阊厦缉胞莹变论文作者签名：选鳖煎指导教师签名：主验笠童丝论文评阅人1：睦匿型熬拯浙婆主医药太堂评阅人2：萱硷竖塾拯逝江太堂邀壹堂医评阅人3：鱼趟至数拯逝逛太堂评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：答辩日期：2Q13：2二25浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得迸姿态堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材

2、料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：啦静(斌签字日期：加侈年≯月彩f7t学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿盘鲎有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：汰．褥躏导师签名：签字日期：知l多年≯月“日鞠己与I签字日期汐。”年2月三7日浙江大学硕士

3、学位论文致谢致谢首先衷心感谢我的导师谢强敏教授，从选题到研究，到最后的论文撰写过程中都得到了导师的悉心指导。在朝夕相处的三年时间里，从研究方向的走向到具体实验的操作，导师丰富渊博的专业知识，严谨求学的研究精神，勤恳踏实的工作作风，严于律己宽以待人的人生态度，使我受益匪浅，是我一生学>-j的榜样!学生在科研之路上的从无到有，在不断失败后的微小结果，离不开导师不厌其烦的教诲。不仅如此，导师在精神，生活中也给予学生无微不至的关怀，教导为人处事之道，虽然短短三年，学生终生受益。对于谢老师的感激之情是无法用言语表达的。感谢董新威师兄、李芬芬师姐在

4、实验中对我的细心指导和帮助。同时也感谢蒋俊霞师姐、贾永良师兄、沈剑、林西西、孙艳红、沈亮亮、刘亚楠、梁家红等在本实验完成中给予的合作和帮助。感谢吴希美教授、柯越海教授实验室各位老师和同学在学>--j和科研中给予的帮助。最后要感谢我的家人给我的坚强支持、鼓励和关怀!在此致以诚挚的谢意!浙江大学硕士学位论文中文摘要Racl调控香烟诱导肺上皮细胞．间质细胞转变国家自然科学基金(#81270095)资助浙江大学医学院药理学系硕士研究生沈辉娟导师谢强敏教授摘要研究背景和研究目的：肺癌和慢性阻塞性肺炎(COPD)是影响人类生活质量的全球性健康问题，

5、发病率呈现逐年增加的趋势，上皮细胞．间质细胞转变(EMT)是COPD和肺癌的重要病理生理过程。我们推测吸烟可能是引起EMT的重要因素。香烟含有大量的氧化物质，这些氧化物质能激活Racl。Racl是Rho家族中的一种小G蛋白，其影响细胞的生存、迁移、骨架重排和代谢，并且Racl的敲除能够有效地抑制细胞的迁移和侵袭。虽然有研究证明Rho信号途径在TGF．p1所诱导的迁移中的作用，以及Smad信号在EMT的调控作用，但是有关Racl在香烟诱导的EMT中的调节作用，则尚未见有报道。因此，本课题就香烟能否诱导EMT及诱导过程的关键因子和信号途径加

6、以研究。方法：1)MTT法检测CSE对A549细胞活性的影响；2)用CSE诱导EMT，用Q—PCR、Elisa、westemblot、细胞免疫荧光染色等方法测定EMT指标如转移生长因子(TGF．p1)、金属基质蛋白酶一9(MMP．9)、Q．肌动蛋白(G【．SMA)、E．钙黏蛋白(E．cadherin)、波形蛋白(vimentin)，和显微镜检测细胞形态；3)用抗TGF—p1中和抗体(ATNA)阻断TGF．pl与其II型受体相结合，确认TGF-pII浙江大学硕士学位论文中文摘要信号通路在CSE诱导的EMT中的作用；4)采用Rac活性试验检

7、测CSE对Racl信号分子的影响，接下来用Racl的抑制剂(NSC23766，NSC)抑制Racl的活性或RaclsiRNA沉默Racl基因，来探究Racl在CSE诱导的EMT中的作用；5)NSC抑制Racl的活性或RaclsiRNA沉默Racl基因后，采用westemblot法来检测Racl对CSE诱导的Akt、Smad2以及P38活性的影响；6)用P13K的抑制剂(LY294002)和Akt的抑制剂(MK．2206)分别抑制P13K和Akt的活性以及Erkl／2抑制剂(U0126)、JNK抑制剂(SP600125)、p38抑制剂(S

8、B203580)阻断Erkl／2、JNK和P38，进一步研究CSE诱导EMT的信号机制。结果：1)细胞活力检测：不同浓度的CSE(O．1‰3％)与肺泡II型上皮细胞(A549)培养24、48、72小时，呈浓