rac1对l02肝细胞株上皮细胞间质转化及增殖和凋亡的影响

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1、隶I轫大◆粤临床医学硕士学位论文万方数据Racl对L02肝细胞株上皮细胞间质转化及增殖和凋亡的影响万方数据EffectsofRaclonepithelial—-mesenchymaltransition，andproliferationandtransitionanprolileratmnan，apoptosisofL02cellsinvitro＼删㈣ADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterof

2、ClinicalMedicineBYWangHui·-huiSupervisedbyProf．ZhugeYu--zhengMedicalCollegeofSoutheastUniversityMay2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所

3、做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：至!呈嗥日期：加tV,-oS一0f东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。亚研究生签名：至

4、丝!转师签万方数据中文摘要摘要Racl对L02肝细胞株上皮细胞间质转化及增殖和凋亡的影响目的近年来，上皮间质转化(epithelialmesenchymaltransition，EMT)在肝纤维化过程中的重要作用己逐渐被证实。众多研究显示Racl在多种细胞内具有调节肌动蛋白细胞骨架重组，导致细胞板状伪足形成和膜褶皱状运动，促进细胞运动和迁移，抑制细胞凋亡等作用。转化生长因子一131(Transforminggrowthfactor-131，TGF一131)在诱导肝细胞EMT中也起到关键的作用。但

5、是，Racl对肝上皮细胞中TGF．Bl诱导的EMT的作用尚不清楚。本文将研究Racl在TGF一131诱导的L02细胞上皮间质转化中的作用，及其对细胞增殖和凋亡的影响，以进一步探讨Racl在肝纤维化发生和发展中的作用。方法1、采用脂质体法将含有Racl基因的四组质粒pExRed-NLSFlag(空载体组)、pExRed-NLSFlagRacl(野生型Racl组)、pExRed-NLSFlagRaclT17N(显性负调控Racl8R)、pExRed-NLSFlagRaclGl2V(持续活化型Racl

6、组)分别转染入肝上皮细胞L02中并用5ng／mlTGF一131处理48h。2、免疫印迹法检测转染后融合蛋白Flag．Racl的表达。3、采用免疫荧光法检测转染48h后上皮标志物CK8和间质标志物vimentin的表达情况。4、采用免疫印迹法观察转染48h后上皮标志物CK8和间质标志物vimentin的表达情况。5、采用细胞划痕实验和Transwell小室检测转染后各组细胞的迁移能力。6、采用CCK-8法测定不同浓度NSC23766处理的L02细胞的增殖情况。7、采用AnnexinV-FITC／P

7、I双染法检测不同浓度NSC23766处理后的L02细胞的凋亡。结果四组质粒均瞬时转染到L02细胞中。同空载体组和野生型Racl组相比，持续活化型Racl组的vimentin蛋白表达水平显著增高，CK8蛋白表达水平显著降低；而同空载体组和野生型Racl组相比，显性负调控Racl组vimentin蛋白表达水平降低，CK8蛋白表达水平显著增高(P

8、低，差异有统计学意义(P0．05)。万方数据东南大学硕士学位论文结论本研究证实Racl可促进TGF．131诱导的L02肝细胞株上皮间质转化和细胞增殖，但对细胞凋亡无明显影响。关键词L02细胞；Racl；上皮间质转化；NSC23766；增殖；凋亡II万方数据英文摘要AbstractEffectsofRaclonepithelial—mesenchymaltransition，andorol