大鼠腹主动脉二次深低温冻存实验的研究

《大鼠腹主动脉二次深低温冻存实验的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要研究背景人体除了角膜、毛发、指(趾)甲、牙质等处外，均有血管分布，血管是血液流经的管道，分为动脉、毛细血管和静脉。动脉血管是一个由内皮细胞，血管平滑肌细胞和成纤维细胞组成的活跃而完整的器官，这三种细胞偶联在一起，通过复杂的自分泌或旁分泌作用而相互调节，保持血管内膜的完整，完成血液的输送，为组织器官输送含氧丰富的血液以维持其正常的生理功能。血管移植在治疗血管源性疾病及组织、器官移植和肿瘤根治术的循环重建中发挥着至关重要的作用。常见的血管源性疾病有：动脉硬化性闭塞症、动静脉血栓形成、动脉瘤等；器官移植领域所面临的供体短缺使得活体器官移植尤其是活体肝脏移植得到广泛开展，而其流入及

2、流出道的重建往往需要进行血管移植；在实体肿瘤根治术中，有时需要一并切除被肿瘤组织侵犯的血管，再进行血管重建，以提高病人术后无瘤生存率。人工血管是目前临床应用最广泛的血管替代物，按材质分为合成血管、生物血管、表面改性人工血管和支架型人工血管，其中合成人工血管最常用，它由各种具有惰性的高分子材料经先进工艺制作而成，主要有涤纶、膨体聚四氟乙烯和聚氨酯人工血管，其分子具有高度晶体化和疏水性，可阻止多聚体水解。但是人工血管缺乏生物活性，无具有抗凝功能的内皮细胞层，移植后血管破裂和血栓的发生率较高，远期通畅率低。低温生物学(Cryobiology)是研究接近或低于O'C的低温环境下的生命现

3、象的科学。近年来低温生物学获得快速发展，低温保存设备不断更新，高效低毒的低温保存液的开发，降温、复温模式的改进，有效地保存了血管的生物活性和管壁机械强度，应用前景更为广阔。低温保存的人体血管已经被广泛应用于临床，并在上世纪80年代出现了专门经营低温保存血管的公司。国内对于低温保存血管的研究起步较晚，其在临床的应用较少。目前，对于低温保存血管的研究只限于一次冻存，而在临床工作中，医生通常不能充分利用一份复温的血管，将剩余的丢弃将是对宝贵血管资源的极大浪费，那么将其再次冻存，复温后其细胞活性，机械性能等方面会有什么样的摘要变化，是否具有临床应用价值，是值得研究的课题。此外，对于二次

4、冻存血管的生物与机械性能的考察，将进一步增加对血管冻存损害的病理改变与机制的认识。目的比较动脉一次和二次深低温冻存后形态学与生物学活性差异：初步探讨二次深低温冻存动脉的临床应用价值。材料与方法雄性Wistar大鼠84只，体重190--210克，乱7周龄，其中60只随机分为3组(每组供受体各半)：对照组(nounalgroup，n=20)，取腹主动脉，长约9～12mm，在手术显微镜下行同种异体新鲜腹主动脉原位移植术，术后缝合腹壁并保温24小时，常规喂养；一次冻存组(controlgroup，n=20)，取腹主动脉，长约9～12mm，修整后依次放入含2．5％、5％、7．5％--甲基

5、亚砜(DMSo)的RPMll640液中平衡15分钟，最后放入含10％DMSO和20％胎牛血清的RPMll640液中，程序降温仪以l℃／min的降温速率降温至．80℃，再以5℃／min降温速率降温至．130℃，放入液氮保存，2周后复温，行同种异体原位腹主动脉移植术，术后缝合腹壁并保温24小时，常规喂养；二次冻存组(testgroup，n=20)，取腹主动脉，长约9-12mm，以次冻存2周后复温，室温下放置l小时候再次冻存，液氮中保存2周后复温，行同种异体原位腹主动脉移植术，术后缝合腹壁并保温24小时，常规喂养；3组大鼠在术后5周行顺行腹主动脉造影，造影后处死，取移植段动脉，观察内

6、膜是否光滑，有无动脉瘤形成等。另取24只大鼠，取腹主动脉，随机分为3组t对照组(n-8)，一次冻存组(n_8)和二次冻存组(n-8)，将每个血管标本切取2段长约3mm的血管环，其中一段应用器官浴槽系统测试其内皮细胞和平滑肌细胞活性，另一段应用噻唑蓝(M!丌)染色结合计算机图像分析评价细胞存活率；每组随机抽取样本行扫描电子显微镜和透射电子显微镜检查，了解内皮细胞层完整性、细胞形态，以及内皮细胞和平滑肌细胞的超微变化，各血管常规行病理切片HE染色和地衣红染色，观察管壁结构变化。结果．病理切片HE染色显示新鲜动脉内皮细胞完整连续，与内皮下层连接紧密，管壁弹力层、平滑肌细胞层排列致密、

7、规则；一次冻存动脉内皮细胞不连续，可见内皮细胞缺失或与内皮下层脱离，动脉壁各层排列较松散；二次冻存动脉Ⅱ摘要内皮细胞层不连续，内皮细胞缺失较一次冻存动脉严重，动脉壁各层排列较松散，与一次冻存动脉无显著差别。地衣红染色显示新鲜动脉弹力层致密，波浪状走形；一次冻存动脉和二次冻存动脉弹力层疏松，并可见薄弱、断裂区域。透射电子显微镜显示新鲜动脉内皮细胞和平滑肌细胞细胞核染色质正常，细胞器完整，胞浆均匀，内皮细胞与内皮下层附着紧密，内弹力层致密均匀；一次冻存动脉内皮细胞细胞核染色质边集，细胞器破坏，细