深低温冻储同种异体气管移植免疫学实验研究

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1、深低温冻储同种异体气管移植免疫学的实验研究(摘要)深低温冻储同种异体气管移植免疫学的实验研究(摘要)在长段气管缺损修复的探索中，研究人员进行了人工气管替代、自体组织代气管及气管移植的实验研究，其中，气管移植可能是最有效的方法。由于气管移植和其他器官一样具有免疫原性，移植后会发生免疫排斥反应，而对于需要进行气管移植的患者来说，大多数是腺癌和鳞癌患者，术后应用免疫抑制剂并不理想，因而近年来深低温冻储后的气管异体移植而无需给予免疫抑制治疗的实验成功备受瞩目。目前，研究人员将深低温冻储技术应用于气管同种异体移植实验中并取得了成功。一些学者报道冻储可以消减气管

2、移植物抗原性并延长移植气管的存活期，同样，在我们以前的实验中，深低温冻储后的犬气管和兔气管同种异体移植后均可长期存活(观察至6个月)，免疫排斥反应较新鲜气管移植后明显减弱。然而，有关深低温冻储消减气管移植物免疫原性的机理和移植后免疫排斥反应特征尚不清楚，并存在着争论。为此，我们进行了以下实验：实验一选择封闭群wistgr大鼠颈部气管段，采用冷冻保护剂经程控降温，液氮冻储1月后复温，通过流式细胞技术，对冻储后的气管与新鲜气管的树突状细胞特异性标记分子0X一62和抗原递呈细胞共刺激分子cD一80及cD一86的变化进行定量分析；并通过免疫组织化学技术观察树

3、突状细胞在气管原位的形态学变化；通过透射电镜技术观察树突状细胞超微结构变化。实验二选择近交系大鼠F344和LewiS行未冻储、冻储同种异体深低温冻储同种异体气管移植免疫学的实验研究(摘要)气管移植，以及LewiS大鼠自体气管移植，对术后2d、7d、30d三个时间的受体大鼠通过细胞流式分析技术和TUNEL技术观察了深低温冻储后大鼠同种异体移植后外周血单个核细胞(PBMC)内细胞因子v—IFN(Thl型细胞因子)和IL-4(Th2型细胞因子)的表达及移植物细胞凋亡特征，及通过普通病理学检查观察三个时间各组免疫排斥反应变化特征情况。结果显示1树突状细胞检查

4、对比新鲜和冻储一个月的气管组织制备的单细胞悬液中标记有OX一62FITC的细胞，冻储气管的OX一62FITC标记率下降，统计学意义相差显著；冻储气管的OX-62FITC表达量下降，统计学意义相差显著。冻储气管组织的单细胞悬液CD80和CD86的表达量均较新鲜气管组织下降，并有统计学意义。对比冻储1个月的气管组织和新鲜气管组织的免疫组化染色结果，冻储后气管树突状细胞肿胀、树突远端淡染、细胞分布稀疏。透射电镜观察树突状细胞经冻储1个月后出现细胞凋亡、空泡变性、溶酶体质地变性、酶活性减弱。2组织学检查移植术后2天，无论是自体或是异体移植均表现出上皮脱失，正

5、常假复层纤毛柱状上皮消失，各组之间比较没有统计学意义。异体移植组大量中性粒细胞浸润，与自体移植和冷冻移植组相比较有显著性差异。移植术后7天，自体和异体组气管上皮均大部分再生，但再生上皮为正常假复层纤毛上皮在自体移植组优于其它两组并有统计学意义，新鲜与冻储后异体移植组间相差性不显著。此期，新鲜异体移植组管壁各层表现为大量淋巴细胞浸润，移植气管段上皮下组织明显增厚，与其它两组相差性显著，而冷冻移植组与自体移植组无明显差深低温冻储同种异体气管移植免疫学的实验研究(摘要)别。移植术后30天新鲜异体移植组正常上皮覆盖率低，上皮下组织纤维增殖，明显增厚，较其它两

6、组相差性显著，而冷冻移植组与自体移植组无明显差别。3PBMC内细胞因子检查y～IFN的表达量测定：在移植后2d、7d、30d，自体移植组与未移植纽相比较没有显著性差异，而新鲜异体移植组在移植术后2d，其表达量明显高于自体组；冻储异体移植组表达量较自体移植组和新鲜异体移植组均明显降低。在移植术后7d、30d，新鲜异体移植组虽然Y—IFN的表达量仍然高于自体移植组，但统计学没有显著性意义；而冻储异体移植组则一直低于新鲜异体移植组。IL-4的表达量测定：在移植后2d、7d、30d，自体移植组与未移植组相比较没有显著性差异，新鲜异体移植组与自体移植组相比较没

7、有显著性差异。但移植术后2d、7d，冻储异体移植组的IL一4表达量较新鲜异体移植组均明显增高，并且在2d、7d时，冻储异体移植纽也高于自体移植组。在移植术后30d，各移植组间数据没有明显差异。4细胞凋亡检查新鲜异体移植纽纽在移植术后三个时间见到大量凋亡细，各时间点凋亡细胞计数均较自体移植组和冷冻气管异体移植组高，相差性显著。冷冻气管异体移植组在术后2d、7d时，凋亡细胞计数均较自体移植组高，与新鲜异体移植组相比较凋亡细胞计数低，相差性显著：移植术后30天，与自体移植纽相差不显著。上述结果提示：深低温冻储同种异体气管移植免疫学的实验研究(摘要)1．树突

8、状细胞主要分布于气管上皮及混合腺内，冻储过程损伤树突状细胞，可以造成气管移植物内树突状细胞数量减少和功能下降