bubr1基因在肝癌细胞中的表达及其sirna转染体的构建

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：施衫签字日期：玉哆年‘月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以

2、将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：巍啾／导师签名(手写)：》)砉支签字日期：晶肜年‘月箩日签字日期：易／肄占月岁日摘要目的：研究BubRl在乙肝病毒阳性及乙肝病毒阴性HCC细胞中的表达差异，明确BubRl与乙肝病毒阴性HCC细胞相

3、关性，并筛选出BubRl表达最高的乙肝病毒阳性肝癌细胞。筛选最佳转染条件为后续研究BubRl在体外对HBV阳性HCC细胞生物学行为的影响以及BubRl与HBX相关性研究提供依据。方法：应用PCR技术和Western．blot技术检测HBV阴性肝癌细胞(HepG2、SMMC．7721、MHCC97H)及HBV阳性肝癌细胞(HepG2．2．15、Hep3B)中BubRl表达情况，筛选BubRl基因高表达HBV阳性肝癌细胞株，构建pEGFP．SiBubRl质粒，稳定转染到高表达HBV阳性肝癌细胞筛选沉默效果最佳序列。结果：通过RT-PCR技术检测结果显示，B

4、ubRlRNA在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌细胞，其中HepG2．2．15中的表达水平最高；Western．blot技术检测结果显示，BubRl蛋白在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌细胞，其中HepG2．2．15中的表达水平最高；3个特异性siRNA．BubRl组转染后，HBV阳性肝癌细胞中BubRl的mRNA表达和蛋白表达明显降低，其中又以siRNA．BubRl．3转染组抑制效果最明显。结论：BubRl在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌细胞，其中HepG2．2．15表达最高。SiRNA转染后能明显降低HBV阳性肝癌细

5、胞中BubRlmRNA和蛋白的表达，siRNA．BubRl．3转染组抑制效果最明显。BubRl与乙肝病毒阳性肝癌细胞明显存在相关性，筛选出BubRl表达最高的乙肝病毒阳性肝癌细胞株和转染条件将为进一步研究BubRl在体外对HBV阳性HCC细胞生物学行为的影响以及BubRl与HBX相关性研究提供依据。关键词：BubRl、HBV阳性肝癌细胞、HepG2．2．15细胞、转染IIAbstractObjective：ABSTRACTResearchBubRlexpressiondifferencesinHBVpositiveandnegativeHCCcells

6、．DesignandselectsiRNAsequencesthatcouldinhibittheexpressionofBubRl．ThentransfectthesiRNAintoHepG2．2．15cellsbyLipofectamineTM2000andresearchtheeffectofhepatomacarcinomacells．Methods：ApplyingthetechnologyofPCRandWesternblottestBubRlexpressioninHBVpositive(HepG2、SMMC-7721、Huh7)andn

7、egativeivercancercells(HepG2．2．15、Hep3B)．Choosethemostrepresentativecellsforsubsequentexperimentalstudy．DesignedpEGFP-SiBubRlplasmidtransfectedintoHepG2．2．15cells．TodetecttheinfluenceofHepG2．2．15cellsaftertransfection．Results：RT-PCRtechnologydetectionresultsshownthatHepG2．2．15ce

8、llstheHBVpositivelivercancercellexpressthehighe