her2与her4在人肺腺癌a549细胞培美曲塞继发性耐药中的作用研究

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1、HER2与HER4在人肺腺癌A549细胞培美曲塞继发性耐药中的作用研究摘要【目的】通过体外诱导耐药建立人肺腺癌A549细胞系的培美曲塞耐药细胞株，检测其在生物学特性方面与亲本株的差异，并进一步研究其耐药性发生与HER2／neu和HER4基因mRNA表达之间的关系。【方法】通过高浓度反复间歇诱导法建立A549的培美曲塞耐药细胞系。CCK8法检测细胞增殖，测定细胞耐药性，绘制生长曲线，计算倍增时间；流式细胞术法检测细胞周期分布及细胞凋亡水平；实时荧光定量PCR法检测耐药株及亲本株HER2／neu和HER4的mRNA表达。【结果】历经6个月建立了耐药指数为6．7倍的培美曲塞耐药的A549

2、／PEM细胞系，其较亲本株的倍增时间延长(33．5±1．71hVS27．1±1．15h)；流式细胞术检测结果示：与亲本株比较，A549／PEM处于Gl期的细胞比例增加(66．03±1．61％VS57．92±1．73％)，S期细胞比例降低(30．05±1．25％VS37．51±1．31％)，差别均有统计学意义(P<0．05)；在高浓度的PEM作用24h后，检测A549与A549／PEM细胞凋亡率分别为23．52％和10．99％，差别有统计学意义(P<0．05)。RT—PCR检测结果示：A549／PEM较亲本株HER2／neu与HER4基因的mRNA表达水平分别增高100．3％和91．

3、8％，差别均有统计学意义(P<0．05)。【结论】培美曲塞耐药的肺腺癌A549／PEM细胞与亲本株的生物学特性有差别；肺腺癌培美曲塞继发性耐药的产生可能与HER2／neu和HER4表达上调有关。硕士研究生：侯宪鹏(肿瘤学)指导教师：于壮副教授【关键词】非小细胞肺癌；肛R2；肛R4；培美曲塞；耐药；实时荧光定量PCRTheRoleofHER2andHER4inSecondaryDrug—resistanceinA549LungAdenocarcinomaCellsInducedbyPemetrexedAbstractObjectiveToestablishaPEM—resistant

4、lungadenocarcinomacelllineandtoinvestigatetherelationshipsbetweenHER2，HER4expressionandPEM-resistance．MethodsparentalcelllineA549wastreatedcontinuouslywithaseriesofhighconcentrationsofPEM．GrowthinhibitionandcellproliferationweredeterminedbytheCCK8assayandthedoublingtimeWascalculated．Thedistrib

5、utionofcellcycleandthelevelofcellapoptosiswereevaluatedbyflowcytometryassay．ExpressionofHER2andHER4Wasanalyzedbyquantitativereal-timereversetranscriptasepolymerasechainreaction．ResultsAPEM-resistantlungadenocarcinoltlaeelrline—A549／PEMwasestablished，withresistanceindexof7．6times．Celldoublingti

6、meofA549／PEManditsparentstrainWas33．5and27．1hours，respectively,withadifferenceintermsofgeneticsbetweenthetwocelllines．A549／PEMcellsshowedmildlycross．resistancetocisplatinanddocetaxel．FlowcytometryanalysisshowedG1arrestanddown-regulationofSphaseinA549／PEMcelllinecomparedtoA549cells，andtheapopto

7、sisrateofA549cellsWashigherthanthatofA549／PEMalter24-hourscontinuousexposingtoPEM(23．52％VS．10．79％)，晰thadifferenceintermsofgenetics．TherelativequantityofHER2andHER4mRNAinA549／PEMcellsindicatedasignificantup-regulationby100．3％and91．8％，res