人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因beclin-1的表达的初步研究

《人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因beclin-1的表达的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、硕士学位论文论文题目人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究研究生姓名杨翼指导教师姓名董万利专业名称神经病学研究方向脑血管病论文提交日期2013年4月中文摘要人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究II人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究中文摘要III中文摘要人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研

2、究中文摘要背景：骨髓间充质干细胞具有自我更新和多向分化的潜能，但是经过长期体外培养后，骨髓间充质干细胞增殖分化能力逐渐丧失，其机制仍不明确。目的：1.在实验室中分离培养人骨髓间充质干细胞，观察其生长。2.利用碱性成纤维细胞生长因子及上皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化，观察神经元样分化中细胞形态等一系列变化。3.初步检测人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化过程中自噬相关基因表达的变化，探讨该基因及其相关意义。方法：1.在患者知情条件下抽取骨髓，以肝素抗凝，以Ficoll-Paque密度梯度离心法(无菌通风

3、柜内操作)来获得人单个核细胞，倒置显微镜下进行细胞计6数后，以1.0×10/L的细胞浓度接种于6孔板，72h换液1次并去除未贴壁细胞，直到贴壁细胞的融合率大于80%时传代培养，传代比例为1∶2。2.传代培养至细胞状态稳定后，接种到预铺多聚赖氨酸的玻片上。等到细胞融合率大于50%时，采用碱性成纤维细胞生长因子开始预诱导神经元样分化的进行。3.利用表皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，观IV人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究中文摘要察其形态变化及生长情况。4.免疫

4、细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶等表达，采用Westernblot初步检测诱导前后人骨髓间充质干细胞自噬相关基因Beclin-1表达的变化。结果与结论：1.人骨髓间充质干细胞可以于体外培养存活一定时间，并可以于体外环境中接受一定程度的预处理。2.经预诱导及诱导后，人骨髓间充质干细胞呈典型神经元样细胞分化，神经元特异性烯醇化酶阳性率为78.7%。3.诱导0.5h后处理组细胞中Beclin-1的表达水平有所增加，但1h后开始逐渐降低。说明体外可以诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，自噬相关基因表达活性可能在诱导分

5、化早期呈高表达，分化过程中逐渐降低。关键词：骨髓间充质干细胞；分化；神经元；自噬；Beclin-1作者：杨翼指导教师：董万利V人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究英文摘要Autophagy-relatedgeneBeclin-1expressioninneuron-likedifferentiationofhumanbonemarrowmesenchymalstemcellsAbstractBACKGROUND:Bonemarrowmesenchymalstemcellshav

6、epotentialtoself-renewalandmulti-lineagedifferentiation.Butafteralongperiodofcultureinvitro,theproliferationanddifferentiationcapacitiesofbonemarrowmesenchymalstemcellsgraduallyloss,themechanismunderlyingwhichisnotclearnow.OBJECTIVE:1.Isolateandculturehumanbone

7、marrowmesenchymalstemcellsinvitro.2.Usingbasicfibroblastgrowthfactorandepidermalgrowthfactortopromotethedifferentiationfromhumanbonemarrowmesenchymalstemcellsintoneuron-likecellsinvitro.3.Toobservetheexpressionofautophagy-relatedgeneBeclin-1indifferentiationfro

8、mhumanbonemarrowmesenchymalstemcellsintoneuron-likecellsinvitro.METHODS:1.UsingFicoll-PaquetoIsolatehumanmononuclearcellsundersterileconditions.Andculturehumanbonemarrowmese