rhoa%2frho激酶对高肺血流大鼠肺动脉高压作用

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1、山东大学博士学位论文RhoA/Rho激酶对高肺血流大鼠肺动脉高压的作用姓名：李福海申请学位级别：博士专业：儿科学指导教师：孙若鹏20070514原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名日期：女Z．￡2堑关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同

2、意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。<保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：』复鼙之亭师签名么蚴日期：[芦啦山东大学博士学位论文．第一部分套管连接法建立高肺血流肺动脉高压大鼠动物模型中文摘要专业儿科博士研究生李福海博士生导师孙若鹏教授目的高黼血流引起的肺动脉高压(pulmonaryhypertension，PAH)是先天性心脏病的常见并发

3、症，往往伴有血管收缩性的增高和进行性肺血管结构重构，其发病机理尚未完全阐明。为了进一步阐明肺动脉高压的发病机理，制作准确可靠的动物模型是非常有必要的，为此，我们设计了一个简单的方法建立高肺血流肺动脉高压大鼠动物模型。方法108只4周龄Wistar大鼠先行编号，计算机随机分到4个分流组(每组15只)和4个对照组(每组12只)，分流组大鼠通过套管连接法建立左侧颈总动脉一颈外静脉分流，对照组大鼠作假手术。分别在实验第1、2、4、8周，将3F导管在透视下沿右侧颈静脉插入右心室，多导生理记录仪测量右心室收缩压(RVSP)用以

4、代替肺动脉收缩压(PVSP)；分流通畅的大鼠均采集右心室、右侧颈总动脉和颈外静脉血液并作血气分析，计算Qp／Qs；分离、称重并计算右心室壁与左心室壁加室阔隔重量比职v／(L￥+SP)]、光镜下观察中等肺动脉形态改变、测量并计算平均中膜厚度占管径百分比(MT％)。免疫组化增殖细胞核抗原(PcNA)染色分析平滑肌细胞(PASMCs)增生情况。用TUNEL细胞凋亡检测试剂盒分析PASMCs凋亡状况。山东大学博士学位论文．结果分流组大鼠表现精神萎靡，生长迟缓。所有分流组大鼠总的存活率为85％(51／60)，其中分流通畅率为

5、86．3％(44／51)，平均Qp／Os为2．26+0．35。与对照组相比，分流组RVSP在术后1周和8周显著升高(分别为23．7±3．5VS12．8±2．6mmHg，t=-一8．799，尸<0．01；27．1±6，7VS14．3±3．1mmHg，卢一5．332，尸<0．01)。长期高肺血流引起以右心室肥大和肺动脉结构重构为特征的形态学改变。术后第4周，中小肺动脉开始出现明显的中膜增厚，表现为PASMCs明显增生、排列紊乱、内皮细胞轻微增生、血管管腔显著变小，MT％与对照组相比显著增大(28．2±4．8VS12．9

6、±2．9，乒一9．192，尸<0．01)。第8周，上述病理改变持续加重，PASMCs肥大、排列更紊乱、内皮细胞显著增生、管腔不对称、狭窄，非肌型小动脉严重肌化以至于管腔接近闭塞，MT％增加到对照组的3．2倍(52，7i9．3vs16．4±3．2，萨一12．617，尸<0．01)。相比而言，RV／(LV+SP)的增加出现较晚，与对照组相比，分流组直到第8周才出现RV／(LV+SP)的明显增加(36．8-----3．2VS31．2±4．1，乒一3．157，P<0．01)。与对照组相比，分流组PCNA一阳性平滑肌细胞在第

7、1周显著升高(9．7±2．5vs7．5±2，1，t=--2．438，P<0．05)到第2周达最高值(15．8±2．9VS8．4+--2．5，￡=一7．213，尸<0。01)，然后，到第4周开始下降，但仍然显著高于对照组(9．8±2．5VS7．2±1．9，乒一2．71l，尸<0．05)，到第8周与对照组无明显差异(5．7±1．6VS7．1±1．6，t=1．925，尸>0．05)。与对照组相比，TUNEL-阳性平滑肌细胞在第2周显著降低(O．61±O．21VS0．84±0．27，t=2．418，尸(0．05)，并持续降

8、低，到第8周几乎观察不到凋亡的平滑肌细胞(0．21±0．17VS0．524-0．22，t=-4．582，尸<0．01)。结论套管连接颈总动脉一颈外静脉引起肺循环血流量明显增加、肺动脉收缩压升高和以平滑肌细胞增殖增强和凋亡减弱为特征的肺血管重构。这是一个简单可靠的建立高肺血流状态大鼠肺动脉高压动物模型的方法。．关键词：肺动脉高压；先天性心脏病；动物模型2山东大